猪链球菌2型重组suilysin的高效表达及其生物学特性

陈正涛; 颜世敢; 张秀美; 张琳; 杨少华; 许传田; 胡北侠; 郝明飞; 李建亮; 《中国兽医学报 》 2013 北大核心 CSCD

摘要：根据猪链球菌2型(SS2)HA9801株溶血素(suilysin,SLY)基因全长序列设计引物,扩增SLY基因,与原核表达载体pET-28a连接,转入大肠杆菌Transetta(DE3)中诱导表达,收集表达菌体,超声破壁、镍柱纯化获得可溶性rSLY蛋白,电泳鉴定后测定rSLY的溶血活性及其溶血谱,系统研究温度、酸碱度、离子强度等理化因素对rSLY溶血活性的影响。结果表明,本试验建立的rSLY原核表达体系能高效可溶性表达具有溶血活性的rSLY,纯度达电泳纯,相对分子质量为54 000左右,100mL菌液诱导后能纯化出约8mg电泳纯的rSLY。rSLY具有高溶血活性,溶血比活为4 057HU/mg。rSLY对多种动物的红细胞有溶血作用,其中对猪、兔和豚鼠的作用最强。rSLY在4℃保存时溶血活性最稳定,保存48h后溶血活性不降低。在pH 6～7和离子强度为500mmol/L时溶血活性最高。本试验获得了高表达、可溶性、高溶血活性的rSLY,首次系统研究了不同理化因素对rSLY生物学活性的影响,为SLY致病机理深入研究及SS2亚单位疫苗和诊断试剂的研制奠定了基础。

关键词： 猪链球菌2型 溶血素 重组溶血素 原核表达 溶血活性