科研产出
利用人工ta-siRNA策略培育抗PVY烟草
《山东农业科学 》 2018
摘要：人工ta-siRNA基因沉默技术具有同时表达多个ta-siRNA和产生ta-siRNA位置固定等特点,在精确性和高效性等方面有明显优势。本研究以马铃薯Y病毒(potato virus Y,PVY)外壳蛋白(coat protein,CP)为靶基因,选取不同位置的3个siRNA为靶序列,烟草TAS3a作为ta-siRNA表达的骨架,分别构建植物表达载体PVY-CP5'、PVY-CPM和PVY-CP3',并利用叶盘法转化烟草NC89。瞬时表达检测结果显示,3个syn-tasiRNA植物表达载体均能在植物体内成功表达siRNA;抗病性鉴定发现,转PVY-CP5'、PVY-CPM和PVY-CP3'的转基因株系中抗病株系的比率分别为45. 08%、27. 21%、61. 90%;Northern杂交分析显示,目的片段转录产物(总RNA)的积累量与植株的抗病性呈负相关,转基因植株中均有siRNA存在,表明植株的病毒抗性是由RNA介导的。
关键词： 人工ta-siRNA 马铃薯Y病毒(PVY) RNA介导的病毒抗性 转基因烟草
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玉米锌指蛋白基因ZmAN14过表达转基因烟草对非生物胁迫的响应
《中国农业科学 》 2015 北大核心 CSCD
摘要：【目的】Zm AN14是玉米A20/AN1型锌指蛋白基因家族成员,该家族在水稻中广泛参与非生物胁迫应答。通过分析玉米旱21(H21)及转Zm AN14烟草在非生物胁迫下的表达情况,为玉米Zm AN14及其家族的功能和分子机制的全面解析提供新信息。【方法】通过对Zm AN14进行序列分析,发现其属于玉米A20/AN1型锌指蛋白基因家族。以玉米自交系H21为研究材料,在三叶期时对其进行非生物胁迫和ABA诱导处理,0、1、3、6、12和24 h时取整株样品,同时在玉米不同生长期取根、茎、叶、胚芽鞘、雌蕊、雄蕊、花丝、苞叶等不同组织样品,利用实时荧光定量PCR方法对Zm AN14的组织表达谱和非生物胁迫及ABA诱导的表达谱进行分析,并结合启动子区顺式作用元件分布情况进行对比分析。将Zm AN14编码序列克隆至GFP表达载体p MDC85,利用亚细胞定位技术验证Zm AN14在胞内的定位情况。将Zm AN14克隆至GAL4 DNA结合结构域载体,并转化酵母,将其涂布在缺陷培养基上观察酵母生长情况,分析其有无转录激活活性。将Zm AN14编码区与植物表达载体p1300-221连接构建超表达载体,并将其转入烟草,选择Zm AN14 m RNA表达量高的T2纯合体株系进行盐、干旱胁迫和ABA诱导,观察其对非生物胁迫的应答。【结果】序列分析表明,Zm AN14开放阅读框(ORF)为516 bp,编码一个171个氨基酸的蛋白,预测分子量为18.3 k D,等电点是8.28。Zm AN14具有A20和AN1结构域,属于玉米A20/AN1型锌指蛋白基因家族。实时定量荧光PCR结果表明Zm AN14在叶中大量表达,受Na Cl、干旱胁迫和ABA诱导上调。Zm AN14与GFP融合蛋白定位于细胞质和细胞核中,定位结果与ZNF216和Zm AN13类似,而Zm AN14本身并没有核定位信号,暗示Zm AN14与其他蛋白结合进入细胞核中发挥其生物学功能。Zm AN14在酵母中表达时不能在酵母缺陷培养基(SD/-Leu-His medium)上生长,因此,未发现其具有转录激活活性。将Zm AN14在烟草中过表达会增加烟草苗期对盐和干旱的抗性。【结论】Zm AN14属于玉米A20/AN1型锌指蛋白基因家族。Zm AN14主要在叶中表达,受非生物胁迫和ABA诱导,在烟草中过表达可以提高烟草苗期对盐和干旱的抗性。Zm AN14可能通过与其他蛋白的互作行使功能。相比较于其他的A20/AN1型锌指蛋白,在转基因烟草中,Zm AN14也参与非生物胁迫应答。Zm AN14与Zm AN13具有高同源性,但在盐和干旱胁迫时,二者却具有向反方向调控的功能。
关键词： 玉米 锌指蛋白 Zm AN14 非生物胁迫 转基因烟草
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凋亡抑制蛋白基因dsRNA转基因烟草表达载体的构建
《天津农业科学 》 2013
摘要：为了利用RNA干扰技术防治烟粉虱,需要构建凋亡抑制蛋白(IAP)基因dsRNA转基因烟草表达载体。利用PCR技术扩增烟粉虱IAP基因,将其连接到pMD18-T载体中,用BglⅡ、XhoⅠ和BamHⅠ、SalⅠ分别酶切,将获得的片段分别反向、正向连接至pUC-RNAi载体,用PstⅠ酶切pUC-RNAi-IAP,回收酶切片段,将其连接到表达载体pCAMBIA-2300-35S中,并进行酶切验证。IAPdsRNA转基因烟草表达载体的成功构建为下一步转基因烟草防治烟粉虱的研究奠定基础。
关键词： 凋亡抑制蛋白 dsRNA 转基因烟草 RNA干扰 烟粉虱
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水稻光敏色素相互作用因子基因OsPILll的表达模式及其在光信号传导中作用的初步分析
《中国水稻科学 》 2012 北大核心 CSCD
摘要：分析了OsPIL11基因(6个潜在的PIF转录因子之一)的表达模式,结果表明OsPIL11在水稻中的表达具有器官特异性,并且受叶片发育、脱落酸、茉莉酮酸和水杨酸调控.为了进一步分析O5PIL11在植物光信号传导中的作用,构建了OsPIL11基因的过量表达载体,并将其转化至烟草.通过比较转基因和野生型烟草植株幼苗在红光和远红光下的光形态建成特征,发现红光下生长的O5PIL11转基因烟草下胚轴较短、真叶和子叶较大;然而在远红光下,转基因和野生型烟草植株的表型没有差异.这些结果表明,OsPIL11参与红光诱导的幼苗去黄化反应,但是不参与远红光诱导的幼苗去黄化反应.
关键词： 水稻 光敏色素相互作用因子 转基因烟草 光信号传导 rice phytochromeqnteracting factor transgenic tobacco light signal transduction
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水稻光敏色素相互作用因子基因OsPIL11的表达模式及其在光信号传导中作用的初步分析
《中国水稻科学 》 2012 北大核心 CSCD
摘要：分析了OsPIL11基因(6个潜在的PIF转录因子之一)的表达模式,结果表明OsPIL11在水稻中的表达具有器官特异性,并且受叶片发育、脱落酸、茉莉酮酸和水杨酸调控。为了进一步分析OsPIL11在植物光信号传导中的作用,构建了OsPIL11基因的过量表达载体,并将其转化至烟草。通过比较转基因和野生型烟草植株幼苗在红光和远红光下的光形态建成特征,发现红光下生长的OsPIL11转基因烟草下胚轴较短、真叶和子叶较大;然而在远红光下,转基因和野生型烟草植株的表型没有差异。这些结果表明,OsPIL11参与红光诱导的幼苗去黄化反应,但是不参与远红光诱导的幼苗去黄化反应。
关键词： 水稻 光敏色素相互作用因子 转基因烟草 光信号传导
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