禽腺病毒4型SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测方法的建立

宋玲玲; 于可响; 王友令; 马秀丽; 袁小远; 刘涛; 鞠艳; 亓丽红; 艾武; 《畜牧与兽医 》 2019 北大核心

摘要：禽腺病毒4型(FAdV-4)是心包积水综合征的重要病原。本研究拟建立FAdV4荧光定量PCR检测方法,为FAdV4感染的流行病学调查、早期诊断、疫病净化提供技术手段。根据GenBank中的禽腺病毒4型六邻体(hexon)基因序列,设计一对引物,扩增hexon基因,将目的基因与载体pEASY-T3连接,构建重组阳性质粒pEAST-T3-H,利用所制备的质粒pEAST-T3-H为模板,对PCR反应体系、反应条件进行优化。建立了禽腺病毒4型SYBR Green I实时荧光定量PCR检测方法,检出的标准品的敏感性为1.7×10拷贝/μL,优于常规的PCR检测方法。该方法与其他禽病病毒均无交叉反应。表明该方法具有特异型强、灵敏度高、重复性好的特点,可用于临床样本的检测。

关键词： 禽腺病毒 血清型4 实时荧光定量PCR 检测