科研产出
乌骨鸡Cathelicidins类抗菌肽基因在大肠杆菌中的融合表达与抑菌活性
《浙江农业学报 》 2013 北大核心 CSCD
摘要：Cathelicidins抗菌肽是含高度保守cathelin结构域的一大类抗菌肽,在家禽天然免疫系统中发挥重要作用。通过PCR方法,从含乌骨鸡Cathelicidins抗菌肽基因(CathL-1,-2,-3)cDNA完整序列的质粒pMDCathL中分别扩增Cathelicidins-1,-2,-3成熟肽的编码序列,将其分别克隆至原核表达载体pET-30a(+)中,构建其重组表达质粒pET30-CathL1S,pET30-CathL2S,pET30-CathL3S,经测序验证的重组质粒转化大肠杆菌Rosetta(DE3)菌株。阳性克隆菌株在37℃,1.0 mmol·L-1IPTG的条件下进行诱导表达。SDS-PAGE和Western-blot分析表明,Cathelicidins成熟肽片段均在大肠杆菌中以融合形式成功表达,表达产物的表观分子量分别为7.0,8.0,7.5 kD。琼脂糖孔穴扩散法检测显示表达产物对多种革兰氏阴性菌和阳性菌均具有很好的抑制活性,其对金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、藤黄微球菌(Micrococcus luteus)、大肠杆菌(Escherichia coli)、鸡白痢沙门氏菌C79-13(Salmonella pullorum)、巴氏杆菌、鸭疫里默氏杆菌、绿脓杆菌等供试菌株均有较强的抑制作用,尤其对抗生素耐药菌株有明显的抑制作用。
关键词： 乌骨鸡 Cathelicidins抗菌肽 融合表达 分离纯化 抑菌活性
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重组鸡Cathelicidins类抗菌肽的融合表达及其对金黄色葡萄球菌抗菌活性的研究
《中国畜牧兽医 》 2013 北大核心
摘要：Cathelicidins抗菌肽在家禽天然免疫系统中发挥重要作用,本研究将已构建的含Cathelicidins抗菌肽成熟肽的阳性克隆菌株Rosetta(DE3)/pET30-CathL1S、pET30-CathL2S、pET30-CathL3S分别在37℃、1.0mmol/L IPTG的条件下进行诱导表达。SDS-PAGE和Western blotting分析结果表明,Cathelicidins成熟肽片段均在大肠杆菌中以融合形式成功表达,表达产物的表观分子质量分别为7、8、7.5ku。琼脂糖孔穴扩散法检测结果显示,表达产物对多种革兰氏阴性菌和阳性菌均具有很好的抑制活性,其对金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、藤黄微球菌(Micrococcusluteus)、大肠杆菌(Escherichia coli)、鸡白痢沙门氏菌C79-13(Salmonella pullorum)、巴氏杆菌、鸭疫里默氏杆菌及绿脓杆菌等供试菌株均有较强的抑制作用,尤其对抗生素耐药菌株有明显的抑制作用。以雏鸡为实验模型研究重组抗菌肽对金黄色葡萄球菌的体内抗菌活性,结果表明,注射中、高剂量CathL-1抗菌肽试验组(5、10mg/kg),在试验结束后取肝脏组织匀浆液涂布于TMP平板,未分离到葡萄球菌。各抗菌肽试验组平均增重均高于感染对照组,其中低剂量抗菌肽试验组(2.5mg/kg)体内抑菌效果虽与普通抗生素相当,但其增重效果尤为明显。
关键词： 抗菌肽 Cathelicidins 融合表达 纯化 抑菌活性 金黄色葡萄球菌
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鸡β-防御素-1基因在大肠杆菌中的融合表达及其初步纯化与抗菌活性测定
《家禽科学 》 2013
摘要：防御素是广泛存在于动、植物体内的一大类阳离子抗菌肽,它们在宿主—家禽天然免疫中发挥着重要作用,是机体抵御外界病原微生物入侵的一道重要防线,在鸡体内只存在Gallinacins类β-防御素。鸡β-防御素-1(Gal-1)对多种致病菌都具有杀菌作用,具有很好的药用开发前景。通过PCR技术从重组质粒pMD-Gal1中克隆出Gal-1基因成熟肽编码区,将该基因克隆至原核表达载体pET-30a(+)中,构建重组质粒pET30a-Gal1,将该质粒转化大肠杆菌Rosetta(DE3)菌株。筛选阳性克隆菌株,用浓度为1.0mmol/L的IPTG进行诱导表达。SDS-PAGE分析表明,Gal-1基因在大肠杆菌中以融合形式成功表达,表达产物表观分子量约为12kDa。对融合蛋白表达条件进行优化,提高可溶组分所占比例。表达上清用Ni2+-NTA Sepharose 4B进行亲和层析纯化,在洗脱液中显示单一条带。琼脂糖孔穴扩散法检测显示,表达产物对多种革兰氏阴性菌和阳性菌均具有明显的抑制活性。Gal-1融合蛋白成功表达为进一步研究鸡β-防御素的功能奠定基础。
关键词： 抗菌肽 β-防御素-1(Gal-1) 融合表达 分离纯化 亲和层析 抑菌活性
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