副猪嗜血杆菌脂多糖的提取、鉴定及初步应用

杨杰; 李建达; 丛晓燕; 杨胜男; 任素芳; 郭立辉; 陈智; 陈蕾; 曾昊; 孙文博; 时建立; 李俊; 邱文彬; 吴家强; 于江; 《中国动物检疫 》 2018

摘要：为建立一种有效提取高纯度副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis,HPS)脂多糖(Lipopolysaccharides,LPS)的方法,进一步阐明HPS的致病机制,通过热酚水法提取LPS,浓缩后,采用酶解法和超离法纯化提取物,分别用硫酸-苯酚法、BCA法、紫外分光光度法,测定LPS提取物中多糖、蛋白及核酸的含量,通过SDSPAGE电泳银染方法鉴定提取物。将提取的LPS作用于猪肺泡巨噬细胞,通过荧光定量方法检测IL-1β的表达量差异。结果显示:纯化的LPS平均产率为2.56%;LPS提取物中不含还原性单糖,多糖含量为3.27%,蛋白含量为0.77%,核酸含量为0.90%;提取的LPS能够引起猪肺泡巨噬细胞IL-1β表达量显著上调。因此,通过该方法提取纯化的LPS可以用于HPS与宿主细胞间作用机制的研究。

关键词： 副猪嗜血杆菌 脂多糖 提取 鉴定