科研产出
禽腺病毒4型SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测方法的建立
《畜牧与兽医 》 2019 北大核心
摘要：禽腺病毒4型(FAdV-4)是心包积水综合征的重要病原。本研究拟建立FAdV4荧光定量PCR检测方法,为FAdV4感染的流行病学调查、早期诊断、疫病净化提供技术手段。根据GenBank中的禽腺病毒4型六邻体(hexon)基因序列,设计一对引物,扩增hexon基因,将目的基因与载体pEASY-T3连接,构建重组阳性质粒pEAST-T3-H,利用所制备的质粒pEAST-T3-H为模板,对PCR反应体系、反应条件进行优化。建立了禽腺病毒4型SYBR Green I实时荧光定量PCR检测方法,检出的标准品的敏感性为1.7×10拷贝/μL,优于常规的PCR检测方法。该方法与其他禽病病毒均无交叉反应。表明该方法具有特异型强、灵敏度高、重复性好的特点,可用于临床样本的检测。
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禽腺病毒4型实时荧光PCR检测方法的建立与应用
《浙江农业科学 》 2018
摘要：本研究建立了可用于检测血清4型禽腺病毒(FAV)的特异性实时荧光PCR方法。试验表明,本方法特异性强,与血清8型FAV无交叉反应。灵敏度试验结果表明,本方法的检测样品最小量可为100拷贝·μL~(-1)。通过临床应用证实,该方法可快速灵敏准确地检测血清4型FAV,极大地缩短检测时间。
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禽腺病毒QU株一个复制非必需区的鉴定
《生物工程学报 》 2008 北大核心 CSCD
摘要：禽腺病毒QU弱毒株属于鸭腺病毒1型病毒,可作为潜在的重组疫苗载体。为确定QU株的复制非必需区,参照鸭腺病毒1型病毒基因组右侧E4区附近序列设计引物,扩增QU株基因组的一段3.4kb片段,插入来自pEGFP-C1质粒的增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因表达盒片段,构建了含EGFP基因的重组质粒pADGFP。采用脂质体介导法,将重组质粒pADGFP与QU株共转染CEF细胞,用96孔板稀释法筛选纯化表达绿色荧光蛋白的重组QU病毒株rQUGFP。该重组毒的生长曲线与亲本毒一致,连续传代后病毒滴度稳定。结果表明,QU株基因组右侧E4区附近一段包括ORF1、ORF8和ORF9三个开放阅读框的区域为病毒的复制非必需区,且插入的EGFP基因可以稳定表达。为进一步以禽腺病毒QU株为载体构建重组疫苗的研究打下基础。
关键词： 禽腺病毒 鸭腺病毒1型 复制非必需区 增强型绿色荧光蛋白 重组病毒
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