DEAE-Sepharose-FF离子交换层析对牛背最长肌中钙激活酶的纯化研究

胡鹏; 罗欣; 杜方岭; 《农产品加工(创新版) 》 2009

摘要：通过DEAE-Sepharose-FF离子交换层析法,对牛背最长肌中钙激活酶(calpain)进行了分离纯化,并确定了最佳分离条件。试验分2个阶段进行离子交换线性梯度洗脱,第1阶段线性梯度为浓度0～215mmol/LNaCl,第2阶段线性梯度为浓度215～500mmol/LNaCl,洗脱流速为2mL/min,并对每一纯化步骤蛋白浓度的变化情况作出了详细的描述和说明;在波长280nm下测定洗脱液的光吸收值,洗脱得到3个蛋白峰,μ-calpain和m-calpain分别在NaCl浓度为130～200mmol/L和230～330mmol/L时被洗脱下来,钙激活酶蛋白抑制剂(calpastatin)在NaCl浓度为25～125mmol/L时被洗脱下来。calpain的分子量约为110kDa,通过对提取液电泳试验表明,检测结果恰好在分子量约为110kDa处有一条清晰的带,说明所得提取物为calpain。

关键词： 钙激活酶 离子交换色谱 分离纯化