科研产出
克拉玛依地区某奶牛场犊牛肺炎病原检测、分离鉴定及药敏试验
《中国奶牛 》 2024
摘要：为确定新疆克拉玛依地区某奶牛场犊牛肺炎的发病病因并提供合适的治疗方案和防控措施,采集该牛场12头患肺炎犊牛的鼻腔黏液,进行了牛呼吸道疾病相关病原检测、分离培养、形态学观察、生化试验、16S rRNA基因测序和药物敏感性试验.结果显示,犊牛肺炎主要是以牛支原体为主的混合感染发病,从病料中分离得到的菌落呈现典型的"煎蛋样",经过生化鉴定和16S rRNA测序分析,分离得到1株牛支原体,将其命名M.bovis KLMY株.通过药敏试验从13种药物里选择出恩诺沙星对M.bovis KLMY株最为敏感.通过以上研究表明,造成此次犊牛肺炎的主要病原为牛支原体,且耐药现象严重,本试验结果为该牛场进一步治疗犊牛肺炎提供了合理有效的依据.
关键词： 犊牛肺炎 牛支原体 混合感染 药敏试验 16S rRNA
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一种新的牛支原体膜蛋白p59的表达与鉴定
《中国病原生物学杂志 》 2019 北大核心 CSCD
摘要：目的寻找新的牛支原体(Mycoplasma bovis)抗原蛋白并进行原核表达,为牛支原体疫苗的制备奠定基础。方法采用生物信息学方法分析牛支原体PG45株基因组,发现一种新的膜蛋白p59,并对其理化性质、蛋白定位、是否存在信号肽及其互作蛋白进行分析预测。通过PCR扩增p59蛋白编码基因,经酶切连接表达载体pET-30a(+)后转化入大肠埃希菌BL21(DE3)感受态细胞,利用IPTG进行诱导表达并进行优化,利用不同浓度咪唑洗脱液来洗脱蛋白。通过Western blot进行鉴定。制备p59重组蛋白兔多抗,通过粘附试验和支原体生长抑制试验验证该重组蛋白的功能。结果生物信息学分析该蛋白可能为ABC转运系统的组成蛋白,其互作蛋白为糖、微量元素摄取的ABC转运系统相关蛋白,可能参与牛支原体摄入营养物质的过程。PCR扩增p59基因,双酶切及测序鉴定pET-30a(+)-p59原核表达载体构建正确,SDS-PAGE分析重组载体转化BL21表达p59重组蛋白,相对分子质量为66×10~3。Western blot鉴定该蛋白为膜蛋白,免疫新西兰兔可刺激产生特异性抗体,即具有抗原性。p59蛋白粘附MDBK细胞试验显示,用p59兔多抗作为一抗时的MDBK(Madin-Darby bovinekidney,牛肾细胞)细胞表面能够粘附更多的P59蛋白,表明p59重组蛋白具有一定的粘附能力。生长抑制试验表明,p59兔多抗能抑制牛支原体在固体培养基中的生长,生长抑制率为45.53%。结论新鉴定的牛支原体膜蛋白p59可能是一种粘附相关蛋白,且具有抗原性,该蛋白多抗血清能抑制支原体的生长,为研究支原体膜蛋白的功能奠定了基础,为牛支原体亚单位疫苗的研制提供了新的靶蛋白。
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