人抗凝血酶Ⅲ的表达及其抗血清的制备

卜澍; 王洪梅; 孙涛; 刘文浩; 王立群; 何洪彬; 《细胞与分子免疫学杂志 》 2013 北大核心 CSCD

摘要：目的用大肠杆菌系统表达重组的抗凝血酶Ⅲ(AT-Ⅲ),制备其抗血清并测定效价。方法利用基因克隆技术获得AT-Ⅲ基因片段,构建原核表达质粒pET32a(+)-AT-Ⅲ,转化大肠杆菌BL21感受态细胞,IPTG诱导表达、蛋白纯化并免疫兔,间接ELISA、Western blot法检测抗血清。结果 SDS-PAGE、Western blot法检测原核表达蛋白结果显示,在相对分子质量(Mr)77 000附近出现特异性条带。对该融合蛋白进行分离纯化后免疫新西兰兔,制备AT-Ⅲ抗血清,间接ELISA方法检测抗血清的最高效价可达到1∶12 800,Western blot分析表明抗血清可与293T、CHO细胞表达的AT-Ⅲ蛋白及AT-Ⅲ蛋白纯品特异性结合。结论成功制备了人抗凝血酶Ⅲ抗血清。

关键词： 抗凝血酶Ⅲ 原核表达 检测 抗血清