科研产出
人胰岛素原基因在大肠杆菌中的表达和纯化
《山东大学学报(理学版) 》 2015 北大核心 CSCD
摘要：将人胰岛素原基因序列(human proinsulin,PI)经密码子优化后与Trx A蛋白融合表达,构建原核表达载体Trx A-PI转入不同大肠杆菌表达菌株BL21(DE3)、Trans B(DE3)和Rosetta-gami(DE3)中。SDS-PAGE显示融合蛋白在3种表达菌株中均有表达,在Rosetta-gami(DE3)中表达量最高,是普通大肠杆菌BL21(DE3)表达量的10倍。通过优化诱导温度等发酵条件,可溶性重组融合蛋白Trx A-PI在Rosetta-gami(DE3)菌株中表达量为3.5 g/L,比未优化时提高约10倍。Trx A-PI用肠激酶酶切后,利用His Trap FF柱分离纯化PI,经Western-blot检测重组PI具有免疫原性。
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ThIPK2基因植物表达载体的构建
《山东农业科学 》 2013
摘要：为培育高度抗逆和无选择标记的转基因小麦,本研究从NCBI数据库中搜索到ThIPK2基因序列,依据该基因编码的氨基酸序列,参照小麦偏爱的密码子对该基因进行密码子优化,并将重复的和不必要的酶切位点去掉后进行人工合成.将改造后的ThIPK2基因插入到强启动子Ubiquitin和终止子AtSac66之间,然后将其插入到含有玉米Ac/Ds转座子背景骨架的植物表达载体中,获得了具有删除选择标记功能的、由玉米Ubiquitin启动子驱动ThIPK2基因的植物表达载体.经过限制性内切酶分析鉴定,该植物表达载体构建成功.
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