科研产出
鸡呼肠孤病毒基因Ⅰ型变异株的分离鉴定和致病性分析
《中国兽医杂志 》 2024 北大核心
摘要：为探究导致山东省某肉种鸡场种鸡出现腿病的病原并进行致病性分析，本试验从该肉种鸡场收集病料，进行鸡胚分离、细胞传代、反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测、序列分析、商品肉鸡的致病性试验和免疫攻毒保护试验。结果显示，分离获得1株鸡呼肠孤病毒(ARV),命名为ARV-LL-2020,该病毒对鸡胚的致死率为100%,在鸡肝癌细胞系(LMH)上具有较强的适应性。ARV-LL-2020毒株与经典的S1133疫苗株同属基因Ⅰ型，但两者的主要抗原σC基因的核苷酸同源性为73.6%,氨基酸同源性为59.1%。ARV-LL-2020毒株回归商品肉鸡能复制出与实际生产中完全一致的发病症状。S1133株商品化弱毒活疫苗对ARV-LL-2020毒株的保护率仅有50%。结果表明，导致种鸡腿病的ARV-LL-2020毒株是1株ARV基因I型变异株，目前S1133株商品化弱毒活疫苗无法对其提供完全保护。
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三株新型鸭源微RNA病毒分离毒株的全基因组序列分析
《畜牧兽医学报 》 2024 北大核心 CSCD
摘要：分离新型鸭源微RNA病毒进行全基因组测序并进行遗传进化分析。对本实验室2021年不同来源的种鸭和肉鸭病料进行PCR检测，初步确定存在一种未知分类的新型微RNA病毒感染。取病死鸭病料组织处理后接种SPF鸡胚分离病毒，设计引物对分离到的病毒进行PCR检测，通过重叠PCR方法进行全基因组扩增测序。将分离病毒各蛋白氨基酸序列两两比对，同时选取GenBank数据库中微RNA病毒代表毒株序列绘制系统进化树，并对主要蛋白P1、2C、3D序列比对分析。结果显示：共分离到三株微RNA病毒，分别命名为21101株、21016株和21075株(GenBank登录号：OQ927377～OQ927379)。基因组长度分别为7 445、7 445和7 447 bp,均包含一个编码2 141个氨基酸的开放阅读框(ORF),可划分为P1、P2、P3三个部分，符合微RNA病毒序列特征。基于全基因组序列遗传进化分析发现，三株分离病毒与本实验室前期分离的Duck/FC22/China/2017(GenBank登录号：MN102111)毒株及上海兽医研究所分离的Duck/AH15/CHN/2015(GenBank登录号：MT681985)位于同一分支，与鸭甲型肝炎病毒(Duck hepatitis A virus, DHAV)遗传距离最近。分离的三株鸭源微RNA病毒进行全基因组测序及遗传进化分析发现，与目前已知的两株微RNA毒株为同一类新型鸭源微RNA病毒。
关键词： 新型微RNA病毒 分离鉴定 基因组测序 遗传进化分析
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一株鸭源多杀性巴氏杆菌的分离鉴定及耐药性分析
《家禽科学 》 2024
摘要：为确认山东省德州市某肉鸭场疑似为鸭多杀性巴氏杆菌感染的病原菌，本试验对于送检病死鸭进行剖检、细菌分离培养、菌落观察、生化试验、PCR鉴定、16Sr RNA基因测序分析以及药敏试验等方法鉴定该病原菌。结果显示：分离得到的病原菌在含有5%胎牛血清的营养琼脂培养基中呈现为圆形、湿润、光滑的灰白色菌落，革兰氏染色为阴性短杆菌，瑞氏染色呈现两极浓染；分离菌株的生化特性可以发酵葡萄糖、蔗糖以及甘露醇，硫化氢、氧化酶等试验阳性；细菌特异性PCR扩增片段与预期条带大小一致；16S rRNA基因序列系统进化树显示与多杀性巴氏杆菌同源性为99%；分离菌株对于新霉素、阿莫西林、氨苄西林、头孢噻肟、林可霉素具有耐药性，对于氟苯尼考、恩诺沙星、多西环素、粘杆菌素B、卡那霉素、大观霉素敏感。本研究结果为鸭源多杀性巴氏杆菌病的防治提供一定参考依据。
关键词： 鸭 多杀性巴氏杆菌 分离鉴定 16S rRNA 耐药性
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2020-2023年山东地区13株3型鸭甲型肝炎病毒的分离鉴定及VP1基因序列分析
《中国家禽 》 2024 北大核心
摘要：为研究2020—2023年山东地区3型鸭甲型肝炎病毒的流行变异情况，试验采集了山东地区13份疑似鸭肝炎病毒感染的病料，通过病毒分离、RT-PCR扩增鉴定，并进行VP1基因测序及遗传变异分析。结果显示：共分离到13株3型鸭甲型肝炎病毒，均属于GⅠa分支，且分属于GⅠa分支不同小分支，其中2020年分离株（20148、20149）与2021年商品肉鸭分离株（SP21042）核苷酸相似性在98.8%～100%;2023年商品鸭分离株（SP23012、SP23014、SP-2、SP-3、SP23009）核苷酸相似性在99.7%～100%;2021年种鸭分离株（21083）与2022年、2023年种鸭分离株（22443、22468、BL23028）、2023年商品鸭分离株（SP23010）核苷酸相似性在98.8%～99.4%，小分支内相似性均高于98.8%，不同小分支间相似性在96.9%～98.2%;2023年部分3型DHAV分离株VP1基因出现了个别氨基酸位点的突变。研究表明，山东地区分离的13株GⅠa分支鸭甲型肝炎病毒VP1基因出现了变异，需要加以关注。
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一株肉种鸡源鸭疫里默氏杆菌分离鉴定及致病性研究
《中国家禽 》 2024 北大核心
摘要：为探究鸭疫里默氏杆菌对鸡的致病力,试验采集疑似感染鸭疫里默氏杆菌的病死肉种鸡肝脏进行病原的分离培养与纯化、革兰氏染色、生化试验、血清型鉴定、16S rRNA基因测序分析及药敏试验,并将分离菌株在SPF鸡、樱桃谷鸭上进行致病性试验.结果显示:分离到1株血清1型鸭疫里默氏杆菌,该菌株与鸭源、鸡源、鹅源鸭疫里默氏杆菌的相似性分别为99.24%~99.47%、99.16%~99.31%、99.04%~99.20%;该分离株对恩诺沙星、卡那霉素、头孢噻肟、多黏菌素B和多西环素较为敏感,对SPF鸡致病性较弱,可引起一过性精神沉郁和泡沫粪,对樱桃谷鸭有较强的致病性,可引起死亡和严重的纤维素性心包炎、肝周炎和气囊炎.研究表明分离的肉种鸡源RA对鸡致病力相对较弱,结果为临床鸡群感染RA的诊断与防控提供参考.
关键词： 肉种鸡 血清1型鸭疫里默氏杆菌 分离鉴定 致病性
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猪流行性腹泻病毒变异株分离鉴定及攻毒模型建立
《生物学杂志 》 2023 CSCD
摘要：猪流行性腹泻（PED）是由猪流行性腹泻病毒（PEDV）引起的一种急性高度接触性肠道传染病。研究成功分离到一株PEDV,命名为PEDV-20200946。对该毒株的S基因进行测序分析，遗传进化树结果显示，该分离毒株属于G2亚群。通过Reed-Muench法测定该毒株毒价为106.1 TCID50/mL。通过动物回归试验进一步探究该分离毒株对仔猪的致病情况，将12头20日龄仔猪平均分为3组，分别为口服攻毒组、口服+肌注攻毒组和对照组。攻毒后观察临床症状，72 h后采集各组的粪便及发病猪的肠道进行RT-PCR检测和免疫组化分析。结果显示，口服+肌注组仔猪发病最快，口服攻毒组次之，对照未发病。剖检攻毒组仔猪可见其肠壁变薄、肠道膨胀，内含大量黄色液体。免疫组化试验显示，攻毒组猪小肠内可检测到大量PEDV阳性信号，而对照组未检测到。研究建立了PEDV-20200946毒株仔猪攻毒模型，为深入研究PEDV流行毒株的分子特性以及弱毒疫苗的开发奠定基础。
关键词： 猪流行性腹泻病毒 流行毒株 分离鉴定 攻毒模型 遗传进化树
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贝莱斯芽孢杆菌ZHX-7的分离鉴定及抑菌促生效果
《生物技术通报 》 2023 北大核心 CSCD
摘要：为获得高效拮抗花生病害的生防微生物，以花生冠腐病菌为指示菌，采用稀释涂布平板法和平板对峙法，从山东莱西采集的花生连作田的病、健株根际土壤样品中筛选到1株高效生防菌株，编号为ZHX-7。结合形态学特征和16S rDNA、gyrB序列分析，确定ZHX-7为贝莱斯芽孢杆菌（Bacillus velezensis）。ZHX-7的菌悬液、无菌发酵液和挥发性气体对花生白绢病菌、基腐病菌、网斑病菌和轮斑病菌菌丝生长的抑制均达到极显著的水平，平板对峙试验表明ZHX-7的菌悬液对花生白绢病菌、基腐病菌、网斑病菌和轮斑病菌的抑菌率分别为64.40%、70.37%、77.43%和65.32%。在以ZHX-7无菌发酵液稀释10倍的PDA培养基上，花生白绢病菌、基腐病菌、网斑病菌和轮斑病菌菌丝的生长抑制率分别为67.81%、52.16%、23.52%和69.93%。双皿对扣试验表明ZHX-7的挥发性气体对花生白绢病菌、基腐病菌、网斑病菌和轮斑病菌的抑菌率分别为86.82%、35.40%、81.70%和44.19%。ZHX-7可产生蛋白酶、纤维素酶和淀粉酶等次级代谢产物；此外，在温室盆栽条件下，ZHX-7有菌发酵液明显促进了花生的生长，同对照相比，鲜质量、干质量分别增加31.24%和26.47%，并且ZHX-7有菌发酵液明显提高了花生对白绢病的抗性，防效达到51.76%。综上所述，本研究筛选获得的一株贝莱斯芽孢杆菌ZHX-7，能够抑制多种花生病原真菌，同时促进花生生长，是一株具有宽广拮抗谱的多功能菌株，具有较好的生防应用潜力。
关键词： 贝莱斯芽孢杆菌 花生病害 分离鉴定 抑菌率 生物防治 促生作用 白绢病菌
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鸭肠炎沙门氏菌致病性差异研究
《家禽科学 》 2023
摘要：沙门氏菌是一种革兰氏阴性短杆菌,血清型众多,可引起各种动物的细菌感染.为探究鸭肠炎沙门氏菌的致病性差异,本试验从山东省三个地区采集50份疑似沙门氏菌感染样品,通过细菌分离及PCR扩增目的基因进行鉴定,后通过动物回归试验研究此次分离的沙门氏菌在雏鸭中产生的影响,并通过PCR扩增及Blast比对分析对所分离到的沙门氏菌进行分型.结果显示,从山东省三个地区采集的50份样品中共分离鉴定出5株沙门氏菌;动物回归试验结果显示:5组沙门氏菌中,第5组相较其他组别致死率最高,致死率高达87.5%,其次为2组、4组、3组、1组;通过Blast比对分析,确定分离到的5株菌均为肠炎型沙门氏菌.本试验为山东地区鸭肠炎沙门氏菌流行情况及致病性差异提供了部分理论依据和数据支持.
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