PCB77人工抗原的合成及多克隆抗体的制备

杜瑞雪; 范仲学; 郭笃发; 李广存; 蔡利娟; 《细胞与分子免疫学杂志 》 2010 北大核心 CSCD

摘要：目的:制备PCB77人工抗原和多克隆抗体,为建立其免疫学检测方法提供技术准备。方法:以3,4-二氯苯基乙酸为半抗原,在低温和弱碱性条件下,采用N-羟基琥珀酰亚胺活性酯法将其与载体BSA偶联,制备PCB77的人工抗原,计算结合比为23∶1,免疫家兔获得了PCB77的多克隆抗体。采用混合酸酐法将半抗原与OVA偶联,结合比为8∶1,用作ELISA检测包被原。间接ELISA检测结果表明,2只兔子的抗血清效价均达1∶20 000以上。抗血清经辛酸-硫酸铵沉淀法纯化后通过ELISA检测验证了PCB77人工抗原的有效性,通过方阵滴定法确定ELISA的最佳工作浓度,建立标准曲线。在0.75~300 ng/L范围内,抑制率与PCB77的质量浓度对数呈显著的线性关系,检测限达到4.44μg/L。结论:合成的PCB77人工抗原具有较好的免疫效果,纯化后的抗体符合后续实验的条件要求,为研制和开发PCB77免疫检测试剂盒奠定了基础。

关键词： 3,4二-氯苯基乙酸 偶联率 人工抗原 多克隆抗体 ELISA