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一株中等毒力牛种布鲁氏菌的鉴定和毒力测定

文献类型： 会议论文

第一作者： 丁家波

作者： 丁家波 1 ; 王芳 1 ; 杨宏军 2 ; 王楠 1 ; 朱良全 1 ; 顾进华 1 ; 张广川 1 ; 王海光 1 ; 赵鹏 3 ; 程君生 1 ; 毛开荣 1 ; 冯宇 3 ;

作者机构： 1.中国兽医药品监察所,北京100081

2.山东省农业科学院奶牛研究中心,济南250231

3.山东农业大学动物科技学院,泰安 271018

关键词： 牛种布鲁氏菌;AMOS-PCR种属分型法;最小感染量;毒力测定

会议名称： 第五届中国兽药大会（中国畜牧兽医学会动物药品学分会2014年学术年会、中国畜牧兽医学会生物制药学分会暨中国微生物学会兽医微生物学专业委员会联合学术论坛）

主办单位： 中国畜牧兽医学会;中国微生物学会;中国兽医协会

页码： 8-8

摘要： 目的:对初步鉴定的牛种布鲁氏菌分离株(B.abortus 343)进行全面的生物学特性检定,为深入研究布鲁氏菌病提供参考菌株. 方法:将B.abortus 343划线培养及梯度稀释,使其形成单个菌落,观察菌落形态.挑取单个菌落进行革兰氏染色和柯氏染色,观察其染色特点;分别接种1.5X106 CFU到含硫瑾(1:25000)或含碱性复红(1:25000)的TSA平板上,观察其生长状态;将接种有B.abortus 343的TSA平板分别置普通培养箱和C02培养箱37℃培养72h,观察其对C02的依赖性;通过醋酸铅试纸条测定B.abortus 343代谢过程中是否释放H2S等.通过平板凝集试验测定布鲁氏菌单相特异性血清(牛种布鲁氏菌单因子血清A、羊种布鲁氏菌单因子血清M和布鲁氏菌粗糙型血清R)与B.abortus 343 抗原的反应性,利用布鲁氏菌AMOS-PCR种属分型等方法对B.abortus 343进行了PCR种属特性鉴定;将B.abortus 343免疫小鼠,分别测定其抗血清与光滑型和粗糙型抗原的反应性.通过小鼠和豚鼠感染试验,全面评价该分离株的毒力.分别以1x105 CFU感染6周龄Balb/c小鼠,测定B.abortus 343在小鼠体内存活时间;以1X109CFU感染Hartley豚鼠,2周后测定试验豚鼠每克脾脏含菌量;分别以IOOOOCFU只、1000 CFU/只、100 CFU/只、25 CFU/只四种不同剂量感染豚鼠,初步测定分离株对豚鼠的最小感染量(MID),在此基础上,进一步以40CFU/只、60 CFL/只和90 CFU/只测定MID. 结果:分离株B.abortus343为光滑型牛种布鲁氏菌,菌落逆光观察微带蓝绿色乳光;革兰氏染色为阴性,柯氏染色为红色,H2S试验阳性.该菌能在含硫瑾和碱性复红的培养基上生长,不依赖于C020B.abortus 343抗原能与A因子血清呈明显凝集反应,免疫小鼠后能产生特异性抗体.以1x10s CFU感染6周龄Balb/c小鼠,可在小鼠体内存活 29周;以1x109 CFU感染350-400g雌性豚鼠,14天后豚鼠每克脾脏含菌量介于2.4x105 _1.2x106之间;以1x10s CFU感染豚鼠1个月后,所有试验豚鼠均能产生特异性光滑型抗体,试管凝集效价介于320-1280之间;B.abortus 343对豚鼠的最小感染量约为40个CFU. 结论:本研究鉴定了一株中等毒力牛种布鲁氏菌(B.abortus 343),为深入研究布鲁氏菌病提供了参考菌株,丰富了我国布鲁氏菌菌种资源.

分类号： S852.612:S858.23

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