文献类型： 中文期刊

作者： 靳青 ¹ ; 张相伦 ¹ ; 魏晨 ¹ ; 刘桂芬 ¹ ; 刘晓牧 ¹ ; 张冬梅 ² ; 谭秀文 ¹ ;

作者机构： 1.山东省农业科学院畜牧兽医研究所/山东省畜禽疫病防治与繁育重点实验室

2.邹城市畜牧业发展中心

关键词： 氧化应激;Fas/FasL信号通路;细胞凋亡;子宫内膜细胞

期刊名称： 畜牧兽医学报

ISSN： 0366-6964

年卷期： 2022 年 006 期

页码： 1819-1828

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 胚胎早期死亡及流产严重影响母牛的繁殖性能，造成极大的经济损失。本研究利用不同浓度双氧水（H₂O₂）处理子宫内膜细胞6 h,通过流式细胞仪、酶标仪分别进行细胞内活性氧（ROS）水平、超氧化物歧化酶（SOD）和过氧化氢酶（CAT）活性以及还原型谷胱甘肽（GSH）与氧化型谷胱甘肽（GSSG）比值检测，建立子宫内膜细胞氧化应激模型。在此基础上，利用流式细胞仪检测细胞凋亡和生长周期，利用荧光定量RT-PCR和Western blot检测Fas/FasL信号通路关键基因的mRNA和蛋白表达水平，并利用慢病毒介导的RNA干扰（RNAi）抑制子宫内膜细胞中Fas基因表达，进一步验证Fas/FasL凋亡通路是否参与氧化应激诱导的子宫内膜细胞凋亡。所有试验都重复3次以上。结果发现，利用200μmol·L^-1 H₂O₂处理子宫内膜细胞6 h,细胞内ROS阳性水平急剧增加（P<0.05）,SOD和CAT活性以及GSH与GSSG比值都显著降低（P<0.05）,说明H₂O₂处理对子宫内膜细胞造成氧化应激损伤。在此处理条件下，生长周期中S期比例显著降低（P<0.05）,凋亡比例显著提高（P<0.05）;Fas/FasL凋亡通路中关键基因Fas、Caspase 8和Caspase 3的mRNA表达水平显著升高（P<0.05）;培养液中FasL浓度以及Fas、Caspase 8和Caspase 3蛋白表达水平显著升高（P<0.05）。进一步研究发现，抑制Fas基因表达在一定程度上降低了氧化应激诱导的细胞凋亡比例以及Fas/FasL凋亡通路中关键基因的表达水平。总之，本研究结果表明，氧化应激通过激活Fas/FasL信号通路促进奶牛子宫内膜细胞凋亡，这为解释氧化应激对子宫内膜细胞的不利影响提供了新的见解。