文献类型： 中文期刊

作者： 张浩 ¹ ; 柳絮 ² ; 宣宁 ² ; 张华 ² ; 高瑞钰 ¹ ; 赵倩倩 ¹ ; 姚方印 ² ;

作者机构： 1.山东师范大学

2.山东省农业科学院生物技术研究中心

关键词： 水稻;抽穗期;基因编辑;DTH8;CRSPR/Cas9

期刊名称： 华北农学报

ISSN： 1000-7091

年卷期： 2020 年 006 期

页码： 58-66

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： CRISPR/Cas9基因编辑技术已经成为水稻育种的重要手段。为培育早熟、丰产、优质的种质资源,以农艺性状优良、迟熟粳稻品种香糯99-25为试验材料,构建了CRISPR/Cas9双靶点表达载体对抽穗期基因DTH8进行编辑,采用农杆菌介导法将构建好的表达载体转化农杆菌EHA105。用携带重组质粒的农杆菌菌液侵染水稻愈伤组织,成功获得了30株T₀转基因苗。对T₀植株利用潮霉素特异引物进行分子检测,其中阳性植株29株,阳性率高达96.7%。设计特异性引物对29株阳性苗的靶位点上下游600 bp进行PCR扩增测序,结果表明,7株转基因阳性苗在第2个靶点附近发生了碱基替换或插入突变。对这7株突变株系的抽穗期进行调查,发现DTH8-2、DTH8-5、DTH8-9、DTH8-10、DTH8-17、DTH8-21的抽穗期提前。利用实时荧光定量PCR检测发现DTH8-2、DTH8-9、DTH8-17与香糯99-25相比DTH8基因表达显著降低。成功利用CRISPR/Cas9基因编辑技术对香糯99-25的DTH8基因进行了编辑,获得了抽穗期提前的DTH8突变体材料,为培育早熟、丰产、优质的水稻品种提供了种质资源。