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NSP4基因突变的重组牛轮状病毒的拯救及其鉴定

文献类型： 中文期刊

作者： 杨少华 1 ; 何洪彬 2 ; 杨宏军 2 ; 陈方园 2 ; 高运东 2 ; 仲跻峰 2 ;

作者机构： 1.山东省农业科学院畜牧兽医研究所/山东省动物疫病防治与繁育重点试验室

2.山东省农业科学院奶牛研究中心

关键词： 轮状病毒;反向遗传技术;NSP4基因

期刊名称： 中国农业科学

ISSN： 0578-1752

年卷期： 2012 年 45 卷 19 期

页码： 4102-4108

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 【目的】通过反向遗传技术结合RNAi筛选和蚀斑克隆方法,拯救出毒力减弱的轮状病毒(rotavirus,RV)。【方法】以野生型轮状病毒CHLY基因组RNA为模板,通过重叠PCR方法在NSP4基因93—104 nt引入5个沉默突变核苷酸,并将毒力位点区135aa、136aa和138aa对应的核苷酸进行定向突变,构建了含有突变位点的转录质粒△pT7-NSP4/89/M。将该质粒与携带RNA聚合酶基因的重组质粒pcDNA3.1/T7-RNAP共转染已接种野生型RV病毒的MA104细胞单层,继续培养24 h,获得了携带NSP4变异基因的RV病毒粒子和野生型RV病毒粒子的混合病毒。将获得的混合病毒接种MA104细胞,通过RNA干扰和蚀斑克隆方法逐步筛选纯化以获得拯救RV。【结果】成功拯救出了NSP4基因变异的RV,该病毒在MA104细胞上的病变和致乳鼠腹泻效果较野生型RV明显减弱。【结论】通过反向遗传技术结合RNAi筛选和蚀斑克隆方法成功拯救出毒力减弱的RV;NSP4毒力位点135aa、136aa和138aa的变异对RV毒力改变和腹泻严重程度有影响。

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[2]针对NSP4基因的shRNA抑制牛轮状病毒的体外增殖. 陈方园,王洪梅,杨少华,武建明,高运东,刘晓,杨宏军,王长法,仲跻峰,王立群,何洪彬. 2010

[3]反向遗传技术在牛轮状病毒研究中的应用. 王丹,宋玲玲,王洪梅,杨宏军,武建明,高运东,仲跻峰,何洪彬. 2011

[4]兔轮状病毒病研究进展. 孙弘宇,赵巧雅,李宏梅,郭慧君,黄兵. 2021

[5]新分离牛轮状病毒及其血清型的研究. 栾婧婧,杨少华,马广强,高运东,仲跻峰,赵宏坤. 2006

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