文献类型： 中文期刊
作者： 杨宏军 1 ; 高运东 1 ; 王长法 1 ; 杨少华 1 ; 仲跻峰 1 ; 赵宏坤 1 ;
作者机构： 1.山东省农业科学院奶牛研究中心
关键词： 金黄色葡萄球菌;乳腺炎;粘附素;纤连蛋白连接蛋白A
期刊名称： 西北农林科技大学学报(自然科学版)
ISSN： 1671-9387
年卷期： 2008 年 36 卷 01 期
页码： 54-58
收录情况： 北大核心 ; CSCD
摘要： 【目的】克隆和表达奶牛乳腺炎金黄色葡萄球菌纤连蛋白连接蛋白A(Fnbp A)的功能基因。【方法】采集奶牛急性乳腺炎乳样,分离金黄色葡萄球菌,提取其DNA作为模板,利用设计合成的特异性引物,对金黄色葡萄球菌进行FnbpA功能基因的PCR扩增。回收目的基因并连接到T载体,鉴定后进行测序,然后将FnbpA基因连接到pET-32a(+)质粒中,经鉴定后转化大肠杆菌BL21感受态细胞,IPTG诱导后采用SDS-PAGE分析蛋白质的表达情况。【结果】PCR产物经电泳成像,仅金黄色葡萄球菌在1.7 kb处出现特异性条带,测序发现其与GenBank公布的FnbpA序列的同源性为98%;蛋白诱导表达SDS-PAGE分析发现,在80 ku处出现特异性条带。【结论】试验成功地克隆到FnbpA基因,并在大肠杆菌中获得高效表达,蛋白量为33.4%,为进一步研究金黄色葡萄球菌粘附素基因工程疫苗奠定了基础。
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