文献类型： 中文期刊
作者： 马保臣 1 ; 秦卓明 2 ; 董玉兰 3 ; 柴同杰 1 ; 袁小远 2 ;
作者机构： 1.山东农业大学动物科技学院
2.山东省农业科学院
3.中国农业大学动物医学院
关键词： 奶牛;乳腺炎;金黄色葡萄球菌;Fnbp;表达
期刊名称： 中国兽医学报
ISSN： 1005-4545
年卷期： 2008 年 28 卷 06 期
页码： 707-710
收录情况： 北大核心 ; CSCD
摘要： 运用PCR方法扩增出奶牛乳腺炎分离株10A的Fnbp配基结合区基因,该片段大小为350bp左右,将其与PGEM-T载体连接,转化到受体菌DH5α中,用Amp/IPTG/X-gal琼脂平板筛选出含有重组子的菌株,鉴定成功后,测序结果表明:奶牛乳腺炎金黄色葡萄球菌10A的Fnbp配基结合区基因的序列与金黄色葡萄球菌Mu50、N315、MSSA476、MW2、RF122、COL以及NCTC8325的相应区域序列同源性分别为97%、97%、95%、95%、96%、94%和94%。将重组克隆载体质粒进行BamHⅠ和XhoⅠ双酶切回收后的DNA,定向插入到融合表达载体PET-32a中,构建了重组质粒PET-Fnbp,并转化到宿主菌BL21(DE3)株中,经IPTG4h诱导后,SDS-PAGE电泳表明,重组蛋白得到高效表达,重组蛋白主要以分泌形式存在,分子量35000左右,Ni柱纯化后的蛋白经Western-blotting检测,具有良好的抗原性和特异性。
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