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转基因玉米多重PCR-基因芯片联用的检测方法

文献类型： 中文期刊

作者： 武海斌 1 ; 孙红炜 1 ; 李宝笃 2 ; 杨崇良 1 ; 路兴波 1 ;

作者机构： 1.山东省农业科学院植物保护研究所

2.青岛农业大学植物保护学院

关键词： 转基因玉米;转化体特异性检测;多重PCR;Oligo探针

期刊名称： 农业生物技术学报

ISSN： 1006-1304

年卷期： 2009 年 17 卷 06 期

页码： 1075-1082

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 根据7种转基因玉米(Zea mays)Bt11、Bt176、Mon810、Mon863、TC1507、GA21和NK603的重组DNA结构分别设计转化体特异性引物,并对引物特异性及灵敏度进行验证。结果表明,所设计引物特异性强,灵敏度达0.1%,在此基础上以玉米内参照基因(ZSSIIb)作对照,对Bt11、Mon810、TC1507和GA21、NK603、Bt176分别作了2对四重PCR反应。根据插入外源基因与插入位点植物基因组DNA的特异结构,分别设计和筛选了7种转基因玉米转化体特异性Oligo探针,制备转基因玉米的寡核苷酸芯片。结果表明,所设计探针特异性强,灵敏度达0.01%。利用基因芯片检测方法结合多重PCR,建立并优化了1套三重PCR反应体系和两套四重PCR反应体系,可在1张芯片上同时有效地检测及鉴定多种转基因玉米,大大提高了检测的准确率和效率。

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