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南极假丝酵母(Candida antarctica)脂肪酶A在毕赤酵母中的表达、纯化及性质

文献类型： 中文期刊

作者： 徐同成 1 ; 李霞 2 ; 马晓航 2 ; 岳珂 2 ; 开雷 2 ; 李铎 2 ;

作者机构： 1.浙江大学生物系统工程与食品科学学院

2.浙江大学生物系统工程与食品科学学院;山东省农业科学院;山东省药学科学院;浙江大学生命科学学院;浙江工业大学生物与环境工程学院

关键词： 南极假丝酵母;脂肪酶A;克隆;表达;纯化;酶性质

期刊名称： 科技通报

ISSN： 1001-7119

年卷期： 2009 年 25 卷 03 期

页码： 255-259+264

收录情况： 北大核心

摘要： 将编码南极假丝酵母脂肪酶A的基因进行克隆,与pPIC9K连接构建成重组载体,并将其电转化入毕赤酵母GS115中。通过MD和MM平板及PCR扩增,筛选和鉴定重组子。重组细胞经过120 h培养后,发酵液上清酶活达到13 U/mL。聚丙烯酰胺凝胶电泳显示,重组脂肪酶分子量约为50 kD,比原始脂肪酶略大。粗酶液经中空纤维素膜超滤浓缩、硫酸铵分级沉淀和离子柱交换层析后,得到在SDS-PAGE上显示为单一条带的重组脂肪酶。该酶最适反应温度为75℃,在70℃保持30 min后,仍具90%以上的活性,最适反应pH值为7.0,在pH6.0～8.0的范围内,具有一定的稳定性。

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