文献类型： 中文期刊

作者： 杨钦 ¹ ; 王长法 ² ; 杨宏军 ² ; 杨少华 ² ; 高运东 ² ; 仲跻峰 ² ; 彭广能 ² ;

作者机构： 1.山东省农业科学院奶牛研究中心

2.山东省农业科学院奶牛研究中心;四川农业大学动物医学院;山东省潍坊市昌乐县畜牧局

关键词： 金黄色葡萄球菌;β-溶血素;克隆;表达;溶血活性;CAMP反应

期刊名称： 中国农业科学

ISSN： 0578-1752

年卷期： 2009 年 42 卷 01 期

页码： 324-330

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 【目的】实现牛乳中金黄色葡萄球菌β-溶血素在大肠杆菌中的高效表达,并分析重组β-溶血素的溶血活性。【方法】PCR扩增牛乳中金黄色葡萄球菌山东分离株β-溶血素基因,构建原核表达载体pET32a+/hlb,并在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达,用96孔血凝板测定重组蛋白的溶血效价,以血琼脂平板法检测重组蛋白的CAMP反应。【结果】测序结果表明,扩增片段含有993bp的ORF,可编码含330个氨基酸的成熟蛋白;SDS-PAGE分析重组蛋白表达水平,IPTG诱导后表达的融合蛋白分子量为57kD,表达量占菌体总蛋白的23.9%;溶血效价分析,金葡菌β-溶血素对绵羊红细胞的溶血效价为278HU·mg-1,对奶牛红细胞的溶血效价为9×103HU·mg-1;重组蛋白在血琼脂平板上和无乳链球菌能发生明显的CAMP反应。【结论】成功表达了牛乳中金黄色葡萄球菌β-溶血素,该毒素对奶牛红细胞的溶血活性明显大于绵羊红细胞,显示出牛源金黄色葡萄球菌β-溶血素的特性明显不同于人源金黄色葡萄球菌β-溶血素,为进一步研究其致病与免疫机理、疫苗设计提供了理论基础。此外,重组蛋白还可用来特异性诊断、鉴别无乳链球菌,为兽医临床诊断提供新的方法。