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游离精氨酸的测定

文献类型： 中文期刊

作者： 滕康利 1 ;

作者机构： 1.山东省果树研究所

期刊名称： 山东果树

ISSN： 1002-2910

年卷期： 1985 年 01 期

页码： 38-40

摘要： 一、原理 精氨酸在碱性溶液中与甲萘酚及次溴酸钠产生红色反应,此反应决定于精氨酸中的胍基,这是胍基的特殊反应,称之“坂口反应”(日本)或“萨卡古西氏反应”(苏联),其灵敏度1: 10 0,────,由于过量的次溴酸钠使红色化合物不稳定,尿素能破坏过量的次溴酸钠,使显色稳定。 二、试剂 ①2%次溴酸钠: 称5.0NaOH加水溶解移入1──ml容量瓶中,加水定容,摇匀吸出0.7ml再加入0.7ml溴摇匀,置于暗处冷藏。2周内有效。②0.02 %甲萘酚: 称0.5──g甲萘酚,加95%乙醇溶解后,移入50ml容量瓶中,将烧杯用95%乙醇冲洗后移入容量瓶中,最后用 95 10乙醇定容.为 1%溶液,暗处冷藏。 吸1%甲萘酚溶液,1ml于50ml容量瓶中,加水定容,为0.02%甲萘酚. ③40%尿素: 称40g尿素加水溶解,移入1──ml容量瓶中,加水定容。 ④10%NaOH 称10gNaOH,加水溶解,移入1──ml容量瓶中,加水定容. ⑤精氨酸标准液: 精确称取0.1──0g精氨酸,加水溶解,移入1──ml容量瓶中,用水反复冲洗溶解精氨酸的烧杯,并将洗液移入容量瓶内,最后定容摇匀。为1──0ppm标准液. 吸1──0ppm标准液10ml,移入1──ml容量瓶中,加水定容摇匀,为1──ppm标准液。 吸1──ppm标准液25ml,移入1──ml容量瓶中,加水定容摇匀,为25ppm标准液。 三、标准曲线绘制 按下表次序吸取试剂,于25ml容量瓶中,加水时沿瓶壁将以上试剂冲洗入瓶底摇匀,放入冰水浴中冷却,至10’C土2“C,再加冷却的次澳酸钠,摇荡5秒钟后,迅速加入尿素摇匀加水定容,摇匀5分钟内进行比色。。波长53 omu,比杯lx Icm。 四、样品测定: 称枝条干样0.5──09,移入1──ml三角瓶中,加水50ml,摇匀,在SP”C水浴15分钟,冷却后过滤。 滤液再通过酸性氧化铝的柱子,除去色素。柱子直径Icm,长25cm。样品:酸性氧化铝0.5:8—10,在样品通过柱子时流速每分钟2—3滴,冷藏各测。 吸取各测液o.1一0·2ml,视样品含量大小而定,可予先试测,按照绘制标准曲线的方法进行测定。如显色为橙黄、桔红,即显色不正常,样品可减量。 五、结果计算 样品含精氨酸PPm一光密度一空白 x K K一斜率x稀释倍数 斜率一标准曲线PPm/光密度 注意事项 1.在显色过程中,如条件控制不好,往往显色不正常,桔红或橙黄,应以红色为正常显色。 2.显色出现不正常时,测样用量应当减少试测。 3.显色要求在10”C左右,如温度不够,在加次澳酸钠以前用水浴降温至适温。再加次澳酸钠显色。 4.显色后定容在5分钟内进行比色,否则红色减退。 5飞色剂次澳酸钠;加入后 j＄荡4—6秒钟后迅速加入尿素,破坏过量的次澳酸钠。因为过量决澳酸钠使红色化合物不稳定. 6.所用试剂均应低温保存. 了.通过酸性氧化铝柱子时流速一定严格控制,否则色素吸收不好. 8.测定含量范围要求在3PPm以下,超出3PPm时与理论数值成直线下降. 9.回收率测定,游离精氨酸的测定@滕康利$山东省果树研究所

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