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具有绿色荧光标记的表达T7 RNA聚合酶的稳定细胞系的建立(英文)

文献类型： 中文期刊

作者： 宋玲玲 1 ; 李欣 1 ; 王洪梅 1 ; 高运东 1 ; 王立群 1 ; 仲跻峰 1 ; 何洪彬 1 ;

作者机构： 1.山东省农业科学院奶牛研究中心;东北农业大学生命科学学院

关键词： 绿色荧光标记;T7 RNAP;真核表达

期刊名称： Agricultural Science & Technology

ISSN： 1009-4229

年卷期： 2010 年 Z1 期

页码： 85-87+153

摘要： [目的]建立具有绿色荧光标记的表达T7RNA聚合酶的稳定细胞系。[方法]从BL21(DE3)大肠杆菌中克隆出T7RNAP基因,定向克隆进质粒FG12后,构建了表达T7RNA聚合酶基因(T7)的Lenti-virus重组质粒FG12-T7RNAP。用此重组质粒转染293T细胞,WB可检测出瞬时表达的T7RNAP蛋白;利用辅助质粒对表达T7的非复制型Lenti-virus病毒进行体外包装,所获得的非复制型Lenti-virus病毒感染BHK-21细胞,利用GFP通过流式细胞分选仪筛选表达T7的细胞系,并利用WB检测基因的表达。[结果]通过WB检测出不同代次的阳性细胞中均能稳定表达目的基因T7RNA聚合酶。[结论]T7RNA聚合酶能顺利在真核细胞内表达,并在此基础上建立的稳定细胞系为RNA病毒体内拯救技术平台的建立奠定了基础。

  • 相关文献

[1]具有绿色荧光标记的表达T7 RNA聚合酶稳定细胞系的建立. 宋玲玲,李欣,王洪梅,高远东,王立群,仲跻峰,何洪彬. 2011

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