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甘蔗花叶病毒第Ⅳ组分离物RT-PCR检测体系的建立及应用

文献类型： 中文期刊

作者： 闫志勇 1 ; 程德杰 1 ; 房乐 1 ; 许小洁 1 ; 田延平 1 ; 贾曦 1 ; 李向东 1 ;

作者机构： 1.山东农业大学植物保护学院植物病毒学研究室;山东省农业科学院;山东省农业微生物重点实验室

关键词： 甘蔗花叶病毒;第Ⅳ组;检测;反转录-聚合酶链式反应

期刊名称： 植物病理学报

ISSN： 0412-0914

年卷期： 2017 年 04 期

页码： 463-469

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 甘蔗花叶病毒(Sugarcane mosaic virus,SCMV)是引起我国玉米矮化叶病的主要病毒。根据其基因组序列,SCMV可以分为4个组,其中第Ⅳ组分离物属于新出现的强毒株系。为了快速检测SCMV尤其是Ⅳ组分离物的发生情况,我们针对SCMV Ⅰ-Ⅳ组及Ⅳ组分离物设计了6对引物,从中筛选出特异性最强的2对引物(Ⅰ-Ⅳ-2F/Ⅰ-Ⅳ-2R和Ⅳ-1F/Ⅳ-1R),进行PCR体系的优化。优化后的PCR体系为:退火温度51℃,d NTP终浓度为0.1 mM,引物终浓度为0.20μM,Taq DNA聚合酶终浓度为0.015 U·μL~(-1)。利用该体系,引物对Ⅰ-Ⅳ-2F/Ⅰ-Ⅳ-2R和Ⅳ-1F/Ⅳ-1R均能够从50 ng感病叶片或0.05 ng病毒RNA中检测出SCMV。通过优化两对引物浓度比例建立了能同时检测SCMV所有分离物及第四组分离物的双重PCR体系。利用该体系从山东、河南及云南均检测出SCMV第Ⅳ组分离物的发生。本研究为SCMV尤其是SCMV第Ⅳ组分离物的快速检测提供了技术支持。

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