科研产出
H5N1亚型禽流感病毒A/Anhui/2/2005活候选疫苗株的构建及其对鸡致病性的研究
《中国预防兽医学报 》 2008 北大核心 CSCD
摘要：A/Ann Arbor/6/60ca(H2N2)冷适应疫苗供体株具有冷适应性、温度敏感性和致弱性表型。本研究利用基因工程技术体外合成A/Ann Arbor/6/60ca(H2N2)冷适应疫苗株具有冷适应性的内部基因PB2、PB1、PA、NP、M、NS,从A/Anhui/2/2005(H5N1)毒株获得HA、NA,并对HA基因上的多个连续碱性氨基酸基序进行了缺失修饰。将上述8个基因片段分别克隆至pBD双向表达载体中测序鉴定。利用质粒反向遗传操作系统,将构建正确的8个重组pBD质粒转染Vero细胞拯救病毒。经RT-PCR和序列测定鉴定,结果表明本试验成功获得了一株H5N1亚型A/Anhui/2/2005重组病毒,将其命名为AH/AAca,救获的重组病毒具有预期的温度敏感性和冷适应性生物学特性。随后进行了AH/AAca人工感染SPF鸡的感染性和致病性试验,结果表明其对鸡既无感染性,也无致病性。AH/AAca的获得为评价其在小鼠、非人类灵长目等动物模型上的保护效力的研究打下了坚实基础,为我国预防人禽流感的流行建立了技术储备。
关键词： 禽流感病毒 反向遗传操作 救获病毒 冷适应性 温度敏感性
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禽流感病毒H9亚型血凝素特异性单克隆抗体的制备和鉴定
《中国兽医杂志 》 2006 北大核心
摘要：以常规方法纯化H 9亚型禽流感病毒,制备了两株分泌抗禽流感病毒H 9亚型血凝素特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞11A 5和11B 2,其上清EL ISA效价均为1∶104,腹水效价为1∶107和1∶106,H I效价上清分别为8、7 log2,腹水效价均为15log2。采用H I方法证明其对禽流感病毒H 9亚型的特异性,通过W estern b lot方法证明两株单抗都针对H 9亚型禽流感病毒HA 1蛋白。
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一步法复合RT-PCR鉴别ND强毒与AI病毒的研究
《西南农业大学学报(自然科学版) 》 2005 北大核心 CSCD
摘要：根据新城疫病毒(NDV)融合蛋白和禽流感病毒(AIV)核蛋白的核酸序列设计2对引物,对NDV和AIV的特异扩增片段分别为156 bp和219 bp,建立了同时检测强毒力NDV和AIV核酸的一步法复合RT-PCR。试验中未能检出弱毒力NDV,IBV,IBDV,REV,REOV及SPF鸡肌肉组织的RNA,从不同年代分离的16个NDV强毒株全为阳性而NDV弱毒株全为阴性。经验证,复合引物与单一引物的扩增效率一致,能够检出NDV和H5亚型AIV的最低病毒量分别为103.7EID50和103.9EID50。试验结果表明,此次建立的一步法复合RT-PCR特异、敏感,适用于强毒力NDV和AIV感染的快速鉴别。
关键词： 新城疫病毒 禽流感病毒 复合RT-PCR 分子检测
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H9与H5亚型禽流感病毒血凝素基因的快速鉴别
《中国病毒学 》 2005 CSCD
摘要：建立一步法RT-PCR检测方法,对禽流感病毒(AVIAN INFLUENZA VIRUS,AIV)的血凝素(HEMAGGLUTININ,HA)分型进行了研究.参照AIV的HA基因序列设计1对引物,对H9和H5亚型AIV进行了扩增,产物大小分别为579BP和177BP.经测试,该引物不与新城疫病毒等鸡的其它传染性病原及鸡肌肉组织的核酸发生交叉反应.敏感性分析发现,从50PG的AIV总RNA中亦能扩增到目的条带.结果表明,此次利用1对引物建立的一步法RT-PCR方法简便适用,可以在一次反应中同时将H9和H5亚型AIV进行快速检测和分型.另外,两个亚型的扩增产物均包含了HA裂解位点在内的基因序列,可通过测序推导氨基酸顺序以预测H5或H9亚型禽流感病毒的潜在毒力.
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H_9与H_5亚型禽流感病毒血凝素基因的快速鉴别
《中国病毒学 》 2005 CSCD
摘要：建立一步法RT-PCR检测方法,对禽流感病毒(Avian influenza virus,AIV)的血凝素(Hemagglutinin,HA)分型进行了研究。参照AIV的HA基因序列设计1对引物,对H9和H5亚型AIV进行了扩增,产物大小分别为579bp和177bp。经测试,该引物不与新城疫病毒等鸡的其它传染性病原及鸡肌肉组织的核酸发生交叉反应。敏感性分析发现,从50pg的AIV总RNA中亦能扩增到目的条带。结果表明,此次利用1对引物建立的一步法RT-PCR方法简便适用,可以在一次反应中同时将H9和H5亚型AIV进行快速检测和分型。另外,两个亚型的扩增产物均包含了HA裂解位点在内的基因序列,可通过测序推导氨基酸顺序以预测H5或H9亚型禽流感病毒的潜在毒力。
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