花生RGA-SSCP实验条件的优化

漆燕; 李双铃; 袁美; 王辉; 任艳; 石延茂; 崔富华; 李加纳; 禹山林; 《山东农业科学 》 2010

摘要：单链构象多态性(SSCP)技术是一种简便、灵敏的多态性检测方法,近年在植物研究中得到了较多应用。为了检测花生品种间抗病基因同源序列(RGA)的单核苷酸差异,对影响花生RGA-SSCP的电泳温度、电压、胶浓度、交联度、变性剂等因素进行了优化。结果表明,碱变性后的PCR产物(PCR产物与碱变性剂比例1∶2)在不加甘油的8%非变性聚丙烯酰胺凝胶(交联度为29∶1)、1×TBE电泳缓冲液、恒温4℃和600V条件下电泳5 h为最佳优化组合。用上述优化方法分析了抗、感北方根结线虫病的亲本及F2群体部分单株,获得了电泳条带细而清晰的SSCP图。该体系的建立对RGA-SSCP标记用于花生基因定位、遗传图谱构建、标记辅助选择等具有重要意义。

关键词： 花生 RGA-SSCP 优化 分子标记