OC-IΔD86(Oryzacystatin-IΔD86)基因的原核表达及活性分析

霍雨猛; 何启伟; 赵双宜; 徐苑芳; 《生物工程学报 》 2008 北大核心 CSCD

摘要：根据OC-IΔD86基因序列,设计合成了7条寡核苷酸片段,通过重叠延伸PCR技术合成了OC-IΔD86基因,利用设计好的BamH I/Xho I酶切位点将OC-IΔD86基因克隆到原核表达载体pet21b中,在1mmol/L的IPTG诱导后5h,OC-I?D86融合基因在大肠杆菌中得到表达,表达产物处于可溶状态,其表达量占总蛋白的11.4%,可溶性蛋白的16.4%;利用Ni-NTA系统纯化该蛋白并经PEG20000浓缩后,活性分析表明该蛋白酶抑制剂在体外表现出对木瓜蛋白酶明显的抑制作用。这为转OC-IΔD86基因的抗根结线虫植物基因工程抗体制备,以及进一步体内的抗根结线虫研究奠定了基础。

关键词： OC-IΔD86 重叠延伸PCR 抑制剂 纯化