科研产出
农杆菌介导的共转化法培育无选择标记转基因水稻的研究进展
《山东农业科学 》 2011
摘要：植物基因工程可有效地改良农作物的品质、性状或产量,尤其是对水稻这样重要的粮食作物,进行该方面的研究意义重大。在遗传转化过程中,抗性标记基因是筛选转化体的有效手段,但也带来了生态环境及食品安全方面的潜在隐患。为培育无选择标记转基因水稻,可采用共转化无选择标记系统,此方法简单易行,可操作性强,尤其是农杆菌介导的共转化法,应用较为广泛。同时,对获得的转基因水稻,其生物安全性也是人们普遍关注的重大问题。本文对近几年应用农杆菌介导的共转化系统培育无选择标记转基因水稻的研究进展及优化方法进行了综述,结合转基因材料安全评价标准,对转基因植物的推广及应用前景进行了展望。
关键词： 农杆菌 共转化 无选择标记 转基因水稻 生物安全性
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大白菜高效稳定遗传转化体系的建立
《山东农业科学 》 2010
摘要：以无菌苗下胚轴为外植体,建立了大白菜高效、稳定再生和遗传转化体系,获得了转基因抗性芽。结果表明,转化效率最高的基因型为Seoul,最佳筛选培养基为MS+2 mg/L6-BA+1 mg/L NAA+2 mg/LAgNO3+300 mg/L Car+10 mg/L Hyg,共培养基pH5.2,完全黑暗培养,侵染液浓度OD600=0.5,侵染时间为10 min,在此条件下转化效果最好。GUS染色结果表明,GUS基因已整合到抗性芽细胞的染色体中,能够稳定表达。
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樱桃矮化砧木‘吉塞拉6号’基因转化体系的建立
《园艺学报 》 2008 北大核心 CSCD
摘要：采用‘吉塞拉6号’甜樱桃矮化砧木(Prunus cerasus×P.canescens)离体叶片外植体,在再生培养基附加生长素的条件下通过根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)EHA105(p35SGUS intron)介导研究了β-葡萄糖醛酸酶基因(GUS)的瞬时表达、稳定表达和转基因植株再生,证明了培养基中生长素(IBA或NAA)的存在可促进基因转化,转化效率比对照提高2倍以上。将500个叶片外植体与EHA105(p35SGUS intron)株系在含有生长素的培养基中共培养,获得了11个转基因株系。采用PCR分析和South-ern Blotting核酸杂交,确定GUS基因已整合到矮化砧木‘吉塞拉6号’植株的染色体上。组织化学染色确定了GUS基因在植株体内的表达。
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提高苹果基因转化效率的研究
《果树科学 》 2000 北大核心 CSCD
摘要：采用根瘤农杆菌（Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｍｅｆａｃｉｅｎｓ）强株系ＥＨＡ１０５（ｐ３５ｓＧＵＳ－ｉｎｔｒｏｎ）研究了影响‘皇家嘎拉’苹果（Ｍａｉｎｓ ｄｏｍｅｓｔｉｃａ Ｂｏｒｋｈ．）外植体的β-葡萄糖醛酸酶（ＧＵＳ）基因的瞬时、稳定表达水平和转基因植株的再生。证明在培养基生长素（ＩＢＡ、ＮＡＡ）存在的条件下，外植体的ＧＵＳ基因的瞬时表达水平提高了３－４倍，而共培养两周后稳定表达水平提高２倍以上，产生９．８个ＧＵＳ愈伤组织表达区域。白化处理促进外植体的基因转化，白化处理的新梢顶端第一节间外植体ＧＵＳ表达区域比常用的叶片外植体高４倍。在生长素存在的条件下 ２％外植体获得了转基因植株。Ｓｏｕｔｈｅｒｎ ＢｌｏｔＤＮＡ杂交和组织化学染色分析证明ＧＵＳ基因已整合到苹果的染色体上，并得以表达。
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培育苹果转基因植株的研究
《落叶果树 》 2000
摘要：采用“皇家嘎拉”苹果（ Ｍａｌｕｓ ｄｏｍｅｓｔｉｃａ Ｂｏｒｋｈ） 白化茎段外植体，通过根癌农杆菌（ Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕ ｍｔｕ ｍｅｆａｃｉｅｎｓ）ＥＨＡ１０５（ｐ３５ＳＧＵＳｉｎｔ） 介导，证明了培养基中存在生长素可促进基因转化，转化效率比对照提高２倍以上。将外植体与ＥＨＡ１０１（ｐ３５ＳＧＵＳ） 株系在含有生长素的培养基中共培养，获得了转基因植株。采用ＰＣＲ 分析和Ｓｏｕｔｈｅｒｎ Ｂｌｏｔ 核酸杂交，确定ＧＵＳ 基因已整合到苹果植株的染色体上。组织化学染色确定了ＧＵＳ 基因在植株体内的表达。
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