鸡产蛋下降综合征(EDS-76)病毒DNA探针制备

曹洪敬; 王文志; 徐学孟; 宫云浩; 孙淑芳; 《中国动物检疫 》 1994 北大核心

摘要：鸡产蛋下降综合征（EDS－76）病毒由鸭胚培养增殖，60％饱和度的（NH4）2SO4沉淀，经差速离心和蔗糖垫超速离心提纯病毒。蛋白酶K和SDS消化后，苯酚抽提、乙醇沉淀分离EDS－76病毒DNA。用HindⅢ、BamHI、PstI、EcoRI进行病毒DNA酶切图谱分析。EDS－76病毒DNA经PstI限制酸酶切与pUC19质粒载体连接，转化了JPA101大肠杆菌细胞，筛选带有插入片段的白色菌落，并将筛选的克隆进杆快速酶切鉴定;用光敏生物素标记制成探针。结果表明：所选克隆只与EDS-76病毒DNA杂交，克隆片段的为3kb，标记探针能检出10pg的EDS－76病毒DNA。

关键词： 鸡产蛋下降综合征病毒（EDSV） 基因克隆 核酸探针