科研产出
玉米锌指蛋白基因ZmAN11的序列分析及在非生物胁迫下的表达研究
《山东农业科学 》 2015
摘要：对玉米锌指蛋白基因Zm AN11进行序列分析,结果表明Zm AN11开放阅读框长度为510 bp,编码一个含169个氨基酸的蛋白,预测分子量为18.06 k D,等电点是8.48。Zm AN11与水稻Osi SAP8同源性最高。在非生物胁迫下的表达研究发现,在盐、冷和热激胁迫下,Zm AN11表达量上调;而在干旱胁迫下,Zm AN11表达量下调。器官特异性分析发现,该基因在玉米叶片及胚芽鞘中表达量较高。Zm AN11基因的序列分析及表达研究为进一步研究其生物学功能和应用奠定了基础。
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玉米锌指蛋白基因ZmAN14过表达转基因烟草对非生物胁迫的响应
《中国农业科学 》 2015 北大核心 CSCD
摘要：【目的】Zm AN14是玉米A20/AN1型锌指蛋白基因家族成员,该家族在水稻中广泛参与非生物胁迫应答。通过分析玉米旱21(H21)及转Zm AN14烟草在非生物胁迫下的表达情况,为玉米Zm AN14及其家族的功能和分子机制的全面解析提供新信息。【方法】通过对Zm AN14进行序列分析,发现其属于玉米A20/AN1型锌指蛋白基因家族。以玉米自交系H21为研究材料,在三叶期时对其进行非生物胁迫和ABA诱导处理,0、1、3、6、12和24 h时取整株样品,同时在玉米不同生长期取根、茎、叶、胚芽鞘、雌蕊、雄蕊、花丝、苞叶等不同组织样品,利用实时荧光定量PCR方法对Zm AN14的组织表达谱和非生物胁迫及ABA诱导的表达谱进行分析,并结合启动子区顺式作用元件分布情况进行对比分析。将Zm AN14编码序列克隆至GFP表达载体p MDC85,利用亚细胞定位技术验证Zm AN14在胞内的定位情况。将Zm AN14克隆至GAL4 DNA结合结构域载体,并转化酵母,将其涂布在缺陷培养基上观察酵母生长情况,分析其有无转录激活活性。将Zm AN14编码区与植物表达载体p1300-221连接构建超表达载体,并将其转入烟草,选择Zm AN14 m RNA表达量高的T2纯合体株系进行盐、干旱胁迫和ABA诱导,观察其对非生物胁迫的应答。【结果】序列分析表明,Zm AN14开放阅读框(ORF)为516 bp,编码一个171个氨基酸的蛋白,预测分子量为18.3 k D,等电点是8.28。Zm AN14具有A20和AN1结构域,属于玉米A20/AN1型锌指蛋白基因家族。实时定量荧光PCR结果表明Zm AN14在叶中大量表达,受Na Cl、干旱胁迫和ABA诱导上调。Zm AN14与GFP融合蛋白定位于细胞质和细胞核中,定位结果与ZNF216和Zm AN13类似,而Zm AN14本身并没有核定位信号,暗示Zm AN14与其他蛋白结合进入细胞核中发挥其生物学功能。Zm AN14在酵母中表达时不能在酵母缺陷培养基(SD/-Leu-His medium)上生长,因此,未发现其具有转录激活活性。将Zm AN14在烟草中过表达会增加烟草苗期对盐和干旱的抗性。【结论】Zm AN14属于玉米A20/AN1型锌指蛋白基因家族。Zm AN14主要在叶中表达,受非生物胁迫和ABA诱导,在烟草中过表达可以提高烟草苗期对盐和干旱的抗性。Zm AN14可能通过与其他蛋白的互作行使功能。相比较于其他的A20/AN1型锌指蛋白,在转基因烟草中,Zm AN14也参与非生物胁迫应答。Zm AN14与Zm AN13具有高同源性,但在盐和干旱胁迫时,二者却具有向反方向调控的功能。
关键词： 玉米 锌指蛋白 Zm AN14 非生物胁迫 转基因烟草
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一个新的陆地棉抗逆锌指蛋白基因GhCHP的克隆与分析
《分子植物育种 》 2014 北大核心 CSCD
摘要：锌指蛋白是一类重要的转录因子,在植物应对外界生物和非生物胁迫的过程中起着极为重要的调节作用。基于二倍体雷蒙德氏棉基因组数据库,本研究从抗枯萎病、耐黄萎病的转基因抗虫棉品种鲁棉研32号中克隆到棉花锌指蛋白类基因Gh CHP。序列分析表明,Gh CHP基因的开放阅读框长度为720 bp,编码239个氨基酸,预测的蛋白质等电点为9.12。通过与其它植物锌指蛋白的序列进行聚类和比对分析,发现Gh CHP与拟南芥的AT2g16050和小麦的Ta CHP极为相近,其中两个保守的C1结构域呈典型的锌指结构。实时荧光定量PCR检测表明,Gh CHP在经过不同胁迫处理的棉花根和叶中的表达模式存在差异。PEG、Na Cl、H2O2、低温和黄萎病菌侵染处理均对Gh CHP的表达产生较大影响,表明Gh CHP可能在棉花生物和非生物胁迫响应中起重要的调控作用,是棉花品种抗逆性分子改良的重要候选基因。
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