科研产出
农杆菌介导的花生遗传转化条件优化
《中国油料作物学报 》 2018 北大核心 CSCD
摘要：为建立花生快速高效的遗传转化体系,以浸泡吸水后的花生半粒种子为转化受体,利用根癌农杆菌介导法,以除草剂Basta抗性筛选及基因组DNA的bar基因PCR检测为指标,优化花生遗传转化体系。研究结果表明,在侵染悬浮液中加入1mmol/L二硫苏糖醇(DTT)提高了农杆菌介导的转化效率(最高提升36.5%);与YEB培养液相比,AB重悬液的使用显著提高了农杆菌的转化效率(最高提升19.3%);农杆菌菌液OD_(600)为0.7时转化效率最高;基因型显著影响转化效率,EXP27-1516的转化效率为69.03%,显著高于14AU01(56.67%);以花生半粒种子为转化受体,从种子培养到形成茁壮根系仅需8周,明显短于子叶节转化所需的13周。优化后的农杆菌介导的花生遗传转化体系为花生转基因研究提供了重要的研究工具。
关键词： 花生 遗传转化体系 半粒种子 二硫苏糖醇(DTT) AB重悬液
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番茄果实特异性启动子的克隆与遗传转化研究
《生物技术通报 》 2012 北大核心 CSCD
摘要：为了实现外源基因在番茄果实中的高效和特异表达,克隆了番茄果实特异基因多聚半乳糖醛酸酶基因(Poly-galacturonase,PG)的启动子。以中蔬四号番茄为材料,建立并优化了以子叶为外植体的番茄高效再生和遗传转化体系;以GUS为报告基因,构建PG GUS植物表达载体,转化番茄。结果表明,在1.0 mg/L ZT的MS分化培养中,番茄子叶的发芽率最高,芽的诱导率高达91%,且发生畸态芽和褐化的外植体最少;通过抗生素浓度对农杆菌的抑制效果试验发现,当头孢霉素的浓度为200 mg/L时,抑制农杆菌的效果最好;成功克隆了番茄PG启动子,将PG启动子驱动的GUS基因转入番茄,对转基因后代果实的GUS染色表明,PG启动子驱动的外源基因在果实中特异表达。
关键词： 番茄 多聚半乳糖醛酸酶 果实特异启动子 遗传转化体系
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大白菜高效稳定遗传转化体系的建立
《山东农业科学 》 2010
摘要：以无菌苗下胚轴为外植体,建立了大白菜高效、稳定再生和遗传转化体系,获得了转基因抗性芽。结果表明,转化效率最高的基因型为Seoul,最佳筛选培养基为MS+2 mg/L6-BA+1 mg/L NAA+2 mg/LAgNO3+300 mg/L Car+10 mg/L Hyg,共培养基pH5.2,完全黑暗培养,侵染液浓度OD600=0.5,侵染时间为10 min,在此条件下转化效果最好。GUS染色结果表明,GUS基因已整合到抗性芽细胞的染色体中,能够稳定表达。
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