科研产出
过量表达TaNHX2基因提高转基因棉花的抗旱耐盐性
《东北农业科学 》 2021 北大核心 CSCD
摘要：液泡膜Na+/H+反向转运蛋白在调节离子平衡,提高植物耐盐耐旱方面起着重要功能。为了研究液泡膜Na+/H+反向转运蛋白基因TaNHX2在棉花耐盐耐旱中的作用,以晋棉7号为受体,利用农杆菌介导法将克隆自小麦的TaNHX2基因转入棉花愈伤组织,通过组织培养胚状体发生途径获得转基因再生植株。以0.5%卡那霉素对再生苗筛选后,利用PCR和RT-PCR进行分子检测,证实外源基因已导入棉花并正常表达。在温室盆栽条件下,于4片真叶期对转TaNHX2基因棉花及其野生型对照施加NaCl或PEG胁迫处理,处理10天后发现盐胁迫或干旱胁迫显著抑制了棉花光合作用,提高了丙二醛（MDA）含量;转TaNHX2基因棉花的光合速率（Pn）显著高于野生型,MDA含量显著低于野生型;转TaNHX2基因棉花在盐旱胁迫后,叶片和根系中的Na+含量显著低于野生型对照。这些结果说明:在棉花中过量表达TaNHX2基因,盐旱胁迫下可以降低转基因棉花的Na+含量,提高光合速率,降低MDA含量,从而提高转基因棉花的耐盐抗旱能力。
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洋葱orf393基因线粒体定位表达载体构建及功能初探
《分子植物育种 》 2020 北大核心 CSCD
摘要：通过转基因拟南芥表型分析对洋葱线粒体差异表达基因orf393的功能进行了初步研究.通过In-Fusion Cloning的方法,将基因orf393与编码线粒体定位的靶向肽序列Rf1b5'融合,构建了orf393基因的线粒体定位表达载体pROK2-Rf1b5'-orf393,通过花序浸染法成功转化至野生型拟南芥,获得了雄性育性降低的拟南芥转基因植株,转基因植株的雄蕊花丝变短,柱头表面光滑几乎没有花粉附着,花药颜色暗淡无法正常开裂,种荚短小皱缩、结实率低.亚历山大染色实验结果显示,转基因植株的花药中花粉量少,仅含有极少量的活性花粉.初步证明线粒体基因orf393与细胞质雄性不育有一定关系,为明确orf393参与洋葱细胞质雄性不育的分子机制提供了参考.
关键词： 洋葱(Allium cepa L.) orf393 细胞质雄性不育 遗传转化
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玉米ZmGS5基因的克隆及其对转基因拟南芥种子发育的影响
《浙江农业学报 》 2019 北大核心 CSCD
摘要：植物种子发育与产量密切相关,研究发现玉米ZmGS5基因与其籽粒发育呈显著性正相关。本研究利用同源克隆技术克隆玉米ZmGS5基因,该基因编码区全长1 491 bp,编码含496个氨基酸的丝氨酸羧肽酶。通过构建ZmGS5过表达载体,采用花序浸染法遗传转化拟南芥,观察转基因拟南芥植株表型及种子变化,初步解析ZmGS5在调控种子发育过程中的功能。结果表明,转基因拟南芥植株莲座叶直径增加,叶片增大,生物量、每株角果数和种子千粒重及种子大小均显著增加。该研究结果初步揭示了玉米ZmGS5基因在调控作物生长发育和产量中发挥重要作用。
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梨组织培养与遗传转化研究进展
《中国农学通报 》 2017
摘要：为了总结梨组织培养和遗传转化方面的研究进展,为今后更好地开展梨遗传改良工作奠定基础,本研究分析了培养基类型、植物生长调节剂种类和浓度等对茎尖培养和叶片培养过程中各环节的影响,阐述了外植体的褐变原因及对策,归纳了目前梨遗传转化研究中导入的外源基因,分析了基因型、抗生素、农杆菌等因素对梨遗传转化效率的影响,最后总结了转基因植株的鉴定方法。在前人研究的基础上认为存在以下问题:(1)受基因型的限制,梨组织培养和遗传转化的范围还较窄;(2)农杆菌介导的遗传转化方法,转化频率不稳定;(3)与品质、抗性等相关的功能基因的遗传转化研究还不够深入。因此,今后需要建立高效稳定的再生和转化体系,开发更有效的遗传转化方法,并加快功能基因的研究,从而加速梨的遗传改良工作。
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头孢霉素与卡那霉素对花生组培苗生根的影响
《山东农业科学 》 2017
摘要：抗性筛选是农杆菌介导的花生遗传转化过程中不可或缺的步骤,但是抗生素的使用对花生组培苗的生长与生根有着显著影响。为了明确抗生素对花生组培苗生根的敏感质量浓度,本试验以花生栽培品种丰花1号组培苗为材料,在培养基中添加不同浓度的头孢霉素与卡那霉素,检测花生组培苗的生根率及植株生长状况并进行统计分析。结果表明:0~250 mg/L的头孢霉素对花生组培苗生根及植株生长基本无影响。卡那霉素对花生组培苗生根影响较为显著,0~10 mg/L卡那霉素对花生组培苗生根与生长基本无影响,10 mg/L卡那霉素条件下组培苗不长侧根,15 mg/L卡那霉素显著抑制根的伸长;切去不生根的组培苗底端后移入MS培养基又能重新生根,不切去底端的组培苗则不生根。经过75 mg/L卡那霉素筛选的抗性组培苗的生根率可达31%。本研究可为花生遗传转化后期根的诱导提供一定的理论支持。
关键词： 头孢霉素 卡那霉素 花生 组培苗 生根率 遗传转化
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黄曲霉漆酶基因HIGS载体的构建及对花生的转化
《山东农业科学 》 2015
摘要：黄曲霉毒素污染严重影响着花生食品安全。通过常规育种的方式培育抗黄曲霉花生新品种进展缓慢,效果也难如人意。HIGS(Host-Induced Gene Silencing,寄主诱导的转基因沉默)技术是一种新兴的RNA干扰技术,为培育抗病植物提供了可能。但该技术在花生上的应用尚未见报道。为创造抗黄曲霉花生新品系,本研究利用该技术构建了两个黄曲霉漆酶基因(Lac1和Lac2)的HIGS载体,并试图将其转化到易感黄曲霉的花生品种粤油20中,获得了转Lac1基因的PCR阳性种子。根据HIGS的原理,黄曲霉侵染后,转基因花生中产生的dsRNA将抑制黄曲霉漆酶基因表达,从而使转基因花生对黄曲霉产生抗性。基于该原理,下一步将对转基因种子是否抗黄曲霉侵染进行鉴定。本研究为利用HIGS技术探索黄曲霉漆酶基因与黄曲霉致病性的关系奠定了基础,为培育抗黄曲霉花生品种提供了一条新思路。
关键词： 花生 黄曲霉 漆酶基因 寄主诱导的转基因沉默(HIGS) 遗传转化
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马铃薯蛋白激酶基因StPki的遗传转化及表达分析
《华北农学报 》 2014 北大核心 CSCD
摘要：以高抗青枯病二倍体马铃薯基因型ED13为材料,克隆了蛋白激酶基因StPki。以StPki基因特异区段为靶标,成功构建了该基因的RNA干扰植物表达载体pCHF1-StPki。利用重组农杆菌株LBA4404(pCHF1-StPki)感染转化ED13茎段外植体,获得了抗庆大霉素的再生植株。利用CaMV35S启动子特异引物对再生植株进行PCR检测,结果表明获得了转基因植株。利用StPki基因的特异引物对转基因植株进行半定量RT-PCR分析,结果显示该基因的转录受到了抑制。马铃薯抗病基因型ED13已被成功转化,且表现出了对StPki基因的RNA干扰活性。
CmMLO2:一个与甜瓜白粉病感病相关的新基因
《园艺学报 》 2013 北大核心 CSCD
摘要：通过RT-PCR方法从甜瓜中克隆得到白粉病感病相关基因CmMLO2的cDNA序列,GenBank登录号为FJ713542。该基因ORF全长1713bp,可编码由570个氨基酸组成的蛋白质,具有7个跨膜螺旋结构,属于典型的跨膜蛋白。RT-PCR结果表明,CmMLO2主要在甜瓜叶片中表达,具有组织特异性。在受到白粉病菌胁迫时CmMLO2表达显著上调,表明CmMLO2很有可能与白粉病发病有关。构建RNAi表达载体pFGC1008-CmMLO2后,利用叶盘转化法转化甜瓜,获得了PCR阳性植株,白粉病接种鉴定结果表明,转化植株对白粉病具有抗性,证明通过ihpRNAi敲除CmMLO2,可以获得对白粉病具有抗性的甜瓜材料。
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