TaNAC14转基因小麦外源目标基因拷贝数及遗传稳定性分析

张立坚; 池青; 杜琳颖; 郭利建; 李玉莲; 刘香利; 马猛; 赵惠贤; 《麦类作物学报 》 2020 北大核心 CSCD

摘要：外源基因拷贝数是影响转基因植物遗传稳定性及其自身表达水平的重要因素。为了探析 TaNAC14基因在小麦生长发育中的生物学功能,本研究通过农杆菌介导的遗传转化法获得了14个T_0代 TaNAC14转基因小麦植株,采用BASTA溶液涂抹和目标序列PCR检测相结合的方法,从14个转基因小麦植株中鉴定出9个阳性植株。通过TaqMan实时定量PCR方法,以小麦内源单拷贝基因Pinb为内参基因,对9个T_0代转基因小麦阳性植株中外源目标基因拷贝数进行检测,结果表明,T_0代转基因小麦再生植株中有5株为单拷贝,4株为双拷贝,其中单拷贝插入整合的比率接近55.6%。选取单拷贝转基因植株收获的种子进行种植,根据BASTA溶液涂抹鉴定对T_(0:1)代小麦株系遗传情况进行分析,结果表明目标基因 TaNAC14是可遗传的。此外,还对T_1代转基因小麦目标基因表达水平进行测定,结果表明,与野生型JW1相比,各转基因小麦植株目的基因 TaNAC14表达量均极显著增加。该研究结果为后续 TaNAC14基因的功能研究奠定了基础。

关键词： 小麦 TaNAC14基因 转基因拷贝数 转基因遗传稳定性 目标基因表达水平