科研产出
利用Cre-loxP自动去除禽痘病毒重组体的报告基因
《家禽科学 》 2010
摘要：在含痘病毒早晚期启动子的绿色荧光蛋白(GFP)基因表达盒侧翼各引入1个loxP序列。以禽痘病毒282E4株作为候选载体,通过同源重组将其插入到病毒基因组的FPV030区域,获得了表达GFP的重组禽痘病毒。然后在Cre酶介导下,利用loxP位点特异性重组剪除了重组病毒基因组中的GFP报告基因。结果表明,以GFP作为筛选标记使重组病毒的构建更为简便,同时利用Cre-loxP系统可以轻松地去除报告基因。这种技术有利于其它抗原性基因重组禽痘病毒的构建。
关键词： 禽痘病毒 绿色荧光蛋白 Cre-loxP 位点特异性重组
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表达新城疫HN和F基因重组禽痘病毒的免疫效力测定
《家禽科学 》 2008
摘要：将8日龄SPF鸡随机分组,分别接种rFPVHN、rFPVF、rFPVNHF重组禽痘病毒,接种量为每只鸡105PFU,另一组群用LaSota活苗经点眼、滴鼻接种106EID50。于免疫后6d、12d和18d测定HI和微量中和抗体。结果发现,3种重组病毒均能刺激鸡群产生抗新城疫病毒特异抗体,但抗体产生时间比LaSota活苗缓慢,且抗体滴度亦低,然而共表达HN和F的rFPVNHF免疫鸡群的中和抗体水平明显比rFPVHN和rFPVF组群高,表明rFPVNHF的保护性免疫更优于HN或F单基因重组禽痘病毒。
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表达新城疫病毒融合蛋白基因禽痘病毒重组体的构建
《家禽科学 》 2006
摘要：通过RT-PCR扩增新城疫病毒F基因,利用禽痘病毒复合启动子、SV40 PolyA终止信号序列构建F基因表达盒。将F基因表达盒与loxp-GFP-loxP序列串联插入禽痘病毒重组臂,构建了禽痘病毒转移质粒载体。在脂质体介导下转染CEF,获得了带有绿色荧光信号的重组病毒rFPVFGFP。通过二次转染,利用Cre-loxP位点特异性重组将重组病毒基因组的GFP自动去除,结果获得了只含新城疫病毒F基因表达盒的重组禽痘病毒rFPVF。试验结果表明,rFPVF复制稳定,表达的F蛋白具有免疫原性,能够刺激鸡只产生抗新城疫病毒的中和抗体。
关键词： 禽痘病毒 新城疫病毒 融合蛋白 位点特异性重组 绿色荧光蛋白
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