犬常见传染病诊断基因芯片的研究与应用

张伟; 吴时友; 尹燕博; 牛钟相; 《中国兽医学报 》 2007 北大核心 CSCD

摘要：根据PCR技术扩增出犬腺病毒(CAV)ORF1(p-Ⅷ)基因、犬细小病毒(CPV)VP2基因、鸡血红蛋白的珠蛋白基因(GLOBc)各保守基因片段;采用RT-PCR扩增出犬冠状病毒(CCV)纤突蛋白(S)基因、犬瘟热病毒(CDV)融合蛋白(F)基因、犬副流感病毒(CPIV)核衣壳结构蛋白(NP)基因、狂犬病病毒(RV)核蛋白(N)基因的各一段保守序列,克隆获取质粒。通过微量点样技术将这些质粒作为探针点在硝酸纤维素膜上,产生二维DNA探针阵列,制作成诊断基因芯片。对360份待检样品匀浆后提取核酸作为模板,扩增相应保守基因片段。通过生物素标记PCR(RT-PCR)技术,将所获得的扩增产物与诊断基因芯片进行特异性的逆向点杂交,然后用扫描仪对芯片进行扫描分析、判断。结果表明,此方法比病毒分离、HI、PCR或RT-PCR方法灵敏度高、特异性强,平均检出率要高20%以上,并可同时对犬多种疫病进行快速诊断。

关键词： 犬常见传染病 基因芯片 快速诊断