染料法实时荧光PCR检测牛嵴病毒

师志海; 王文佳; 王亚州; 孟红丽; 闫祥洲; 成海建; 施巧婷; 王二耀; 徐照学; 《中国兽医科学 》 2021 北大核心 CSCD

摘要：牛嵴病毒（BKoV）可能是与犊牛腹泻相关的潜在病原,为建立快速检测BKoV的方法,本研究根据BKoV 3D基因的保守序列,设计特异性引物对,通过优化反应条件和体系,建立了基于Eva Green染料检测BKoV的实时定量PCR方法。该方法 Ct值与模板在1.08×10²～1.08×10⁸copies/μL范围内线性关系良好,扩增效率为106.4%;该方法仅检测BKoV时结果呈阳性,检测其他犊牛腹泻相关病原时结果呈阴性;能检出BKoV的最低检出限为10.8 copies/μL;批内和批间的变异系数均小于2%,重复性好。用该方法对311份采自河南、山东和四川省的犊牛腹泻样本进行检测,河南省BKoV的检出率为7.38%（20/271）,其他两省的样本均未检测出BKoV。本研究建立的方法灵敏度高、特异性强、稳定性好,为BKoV的检测和流行病学调查提供了有力手段。

关键词： 牛嵴病毒 犊牛腹泻 EvaGreen染料