小麦miRNA靶基因的体外实验验证

房春豪; 陈志浩; 王开; 汪晓璐; 徐文竞; 祁广; 马朋涛; 韩冉; 刘成; 《山东农业科学 》 2024 北大核心

摘要：miRNA是一类内源非编码单链小RNA,广泛存在于动植物中,主要通过切割靶基因或者抑制靶基因表达参与细胞分化、生长和发育等多种生物学调控.目前缺少一种快速简便验证miRNA靶基因的方法.本研究基于前期筛选到的小麦特有的miRNA——Tae-miR9666a,合成其前体及前体突变体,并连接到表达载体上,构建含有GFP(绿色荧光蛋白)标记的靶基因过表达载体,共转化烟草,通过观察GFP的荧光亮度判断靶基因的切割情况,以此来验证miRNA与靶基因的相互作用.结果发现,共转miRNA前体的烟草叶片的荧光亮度较低,表明靶基因被miRNA切割,其后的GFP无法正常表达;共转miRNA前体突变体的烟草叶片的荧光亮度与单转靶基因的相当,表明miRNA前体突变体未切割靶基因,导致GFP 正常表达.本实验有效证明了miRNA的靶基因切割情况,也表明利用烟草验证miRNA与靶基因相互作用是可行的.

关键词： 小麦miRNA 靶基因 Tae-miR9666a GFP 本氏烟草