科研产出
携带遗传标记的新型鹅细小病毒感染樱桃谷北京鸭再现短喙与矮小综合征
《中国兽医学报 》 2023 北大核心 CSCD
摘要：为了阐明是否新型鹅细小病毒（novel goose parvovirus, NGPV）单独感染樱桃谷北京鸭能够复制出短喙与矮小综合征（short beak and dwarfism syndrome, SBDS）的所有临床症状，并进一步解析NGPV致病机理。本研究中，基于NGPV分离株SDJN19,构建了携带遗传标记的感染性克隆质粒pJNm。pJNm质粒转染9日龄樱桃谷北京鸭胚拯救出感染性病毒rJNm。rJNm半数致死量(ELD50)达到5×106.25/mL,与亲本株接近。rJNm感染2日龄樱桃谷北京鸭，能够复制出SBDS的所有典型临床特征，包括短喙、舌头外伸、生长迟缓、站立行走困难等。试验还表明rJNm能够通过水平传播途径感染樱桃谷北京鸭，感染鸭依旧表现出典型的SBDS特征。水平接触组鸭在感染后31 d能够同时在体内检测出高的病毒载量和高水平血清沉淀抗体，预示着NGPV可以持续性感染樱桃谷北京鸭。本研究结果表明SBDS确系NGPV感染所致，为研制针对性的预防性生物制剂以及深入解析NGPV的致病机制奠定了坚实基础。
关键词： 新型鹅细小病毒 短喙与矮小综合征 感染性克隆 拯救 樱桃谷北京鸭
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整合REV LTR的自然重组马立克氏病毒GX0101的全基因组序列分析
《中国兽药杂志 》 2017 北大核心
摘要：GX0101是一株整合禽网状内皮组织增生症病毒(REV)长末端重复序列(LTR)的重组马立克氏病病毒(MDV)。基于MDV GX0101的细菌人工染色体感染性克隆利用高通量测序技术完成了对其全基因组的序列分析。GX0101全基因组长178101 bp,其基因组的TRL、UL、IRL、IRS、US和TRS区分别长12758 bp、113572 bp、12741 bp、12700 bp、11695 bp、13134 bp。与Md5不同,GX0101含有一个sorf2基因。同时,GX0101全基因组含有一个REV LTR重组片段,位于其基因组US区的sorf1中,sorf2基因前267 bp碱基处。通过与已发表的近10株MDV的比较,发现GX0101与英国分离株C12/130的两个不同毒力的感染性克隆p C12/130-10和p C12/130-15同源性最高。GX0101的全基因组序列的比较分析,有助于进一步阐明MDV致病性、传播性相关的基因,也有助于揭示不同地域间MDV的遗传变异和演化关系。
关键词： REV LTR 重组MDV 感染性克隆 高通量测序 全基因组
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猪圆环病毒2型双拷贝感染性DNA的构建及体外拯救
《生物工程学报 》 2009 北大核心 CSCD
摘要：感染性分子克隆是研究病毒复制和致病机制的有力工具。本研究应用PCR诱变技术解决了外源片段易于自连的难题,成功将2个PCV2SD1株全基因组(DQ346683)头尾相接插入到真核生物表达载体pSK的多克隆位点中,构建重组质粒pSK-2PCV2;另外课题组成功构建含单个PCV2全基因组的pSK-PCV2和自身环化质粒ds-PCV2。将所得3种质粒分别转染无PCV污染的PK-15细胞系,经10次连续传代后,间接免疫荧光试验检测显示三者均在细胞核中聚集大量的病毒抗原;经RT-PCR检测都有PCV2特异性基因转录;透射电镜下可观察到直径约为17～20nm的典型PCV2病毒粒子;经测序鉴定所拯救出的病毒与亲本病毒核苷酸同源性为100%。拯救出的PCV2与亲本病毒具有相同的病毒学及分子生物学特性。本研究应用PCR诱变技术成功构建PCV2双拷贝感染性克隆,并经体外拯救证实其具有感染性,为进行PCV2分子特性及致病机理研究打下了基础。
关键词： 猪圆环病毒2型 单拷贝 双拷贝 自身环化 感染性克隆 体外拯救
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