科研产出
斜纹夜蛾核型多角体病毒Ⅱ型DNA复制原点的功能分析
《蚕业科学 》 2019 北大核心 CSCD
摘要：斜纹夜蛾核型多角体病毒Ⅱ型(SpltNPVⅡ)基因组DNA含有7个同源重复区(hr).采用脂质体介导转染法和实时荧光定量PCR对7个hr在异源病毒感染的BmN和Sf21细胞中的复制原点功能进行分析.结果表明,SpltNPVⅡhr在BmN和Sf21细胞中均具有复制原点功能,但其复制起始能力不同.BmNPV感染的BmN细胞中,hr4复制起始能力最强,每微克DNA中的拷贝数达405*10~5个,hr5复制起始能力最弱,仅为221*10~4个拷贝/μg;AcMNPV感染的Sf21细胞中hr1复制起始能力最强,可达592*10~6个拷贝/μg,hr5复制起始能力最弱,仅为191*10~4个拷贝/μg.另外,SpltNPVⅡhr在异源细胞中的复制起始能力与其所含回文序列及复制相关的基序等特征结构的数目存在显著的正相关.
关键词： 复制原点 同源重复区 斜纹夜蛾核型多角体病毒
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斜纹夜蛾核型多角体病毒Ⅱ型同源重复区的增强子功能分析
《蚕业科学 》 2019 北大核心 CSCD
摘要：斜纹夜蛾核型多角体病毒Ⅱ型(SpltNPVⅡ)基因组DNA含有7个同源重复区(hr).采用脂质体介导转染法和瞬时表达实验对7个hr在异源病毒感染的BmN和Sf21细胞中增强异源ie1启动子转录活性的功能进行分析.结果表明,除hr5外,SpltNPVⅡhr均能增强BmNPV ie1启动子的转录活性,其中hr1、hr4和hr7增强效率较高,为对照的30~40倍;7个hr均能显著增强AcMNPV ie1启动子的转录活性,其中hr7增强效率高达1 246倍,其余增强效率在17~538倍之间.另外,SpltNPVⅡhr增强异源ie1启动子转录活性的效率与其所含的正反向重复序列、回文序列以及与复制相关的基序等特征结构的数目存在显著的正相关.
关键词： 斜纹夜蛾核型多角体病毒 同源重复区 增强子
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斜纹夜蛾核型多角体病毒Ⅱ型分离株同源重复区hr1的结构功能分析
《江苏农业科学 》 2019
摘要：斜纹夜蛾核型多角体病毒Ⅱ型(Spodoptera litura nucleopolyhedrovirusⅡ,SpltNPVⅡ)基因组DNA同源重复区hr1大小为1 746 bp,含有6个64 bp不完全回文序列、4个正向重复序列以及7个与病毒基因组DNA复制相关的基序。瞬时表达分析结果表明,SpltNPVⅡhr1在感染野生型家蚕核型多角体病毒(Bombyx mori nucleopolyhedrovirus,BmNPV)和苜蓿丫纹夜蛾多粒包埋型核多角体病毒(Autographa californica multiple nucleopolyhedrovirus,AcMNPV)的BmN和Sf21细胞中均具有增强早期基因ie1启动子活性的功能,增强效率分别为30、350倍;实时荧光定量PCR结果显示,hr1在BmN和Sf21细胞中具有基因组DNA复制起始原点的功能,拷贝数分别为(8.46×10~4±6.13×10~3)、(5.92×10~6±2.95×10~5)copies/μg DNA。研究证明,SpltNPVⅡhr1在异源细胞BmN和Sf21中具有复制起始原点和增强子的双功能作用。
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斜纹夜蛾核型多角体病毒Ⅱ型分离株同源重复区hr5的结构功能分析
《山东农业科学 》 2017
摘要：对斜纹夜蛾核型多角体病毒Ⅱ(Splt NPVⅡ)基因组DNA中的同源重复区hr5的结构功能进行研究。结果表明,Splt NPVⅡhr5大小为389 bp,含有3个64 bp不完全回文序列,回文序列的中心均含有1个PvuⅠ限制性酶切位点,并且存在1个与病毒基因组DNA复制相关的motif(CGATT)基序。瞬时表达分析表明,hr5在野生型病毒感染和未感染的细胞中均具有增强早期基因ie1启动子活性的功能;实时荧光定量PCR结果显示,hr5在野生型病毒作为辅助病毒时,具有基因组DNA复制起始原点的功能。研究证明Splt NPVⅡhr5具有复制起始原点和增强子的双功能作用。
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