鸭坦布苏病毒包膜蛋白的原核表达和间接ELISA抗体检测方法的建立

郝明飞; 张琳; 胡北侠; 崔言顺; 张秀美; 《动物医学进展 》 2012 北大核心 CSCD

摘要：为建立特异性和敏感性高的检测鸭坦布苏病毒感染的方法,采用原核表达系统对鸭坦布苏病毒(DTMUV)E基因进行了克隆与表达,SDS-PAGE电泳结果显示融合蛋白大小为54.3ku。Western blot结果表明,经亲和层析法纯化后的重组蛋白能与DTMUV阳性血清发生特异性反应。以纯化的重组E蛋白作为包被抗原,初步建立了检测E蛋白抗体的间接ELISA方法。对ELISA各种反应条件进行了优化,确定了最适工作条件。优化后确定的抗原最适包被浓度为7μg/mL,血清的最佳稀释度为1∶320,酶标抗体最适稀释度为1∶1 000。在优化条件下,阴性和阳性临界值判定标准为0.324 4。本研究建立的快速检测DT-MUV抗体的间接ELISA方法为该病的检测和流行病学调查提供了技术手段。

关键词： 鸭坦布苏病毒 包膜蛋白 原核表达 间接酶联免疫吸附试验